兔抗LEFTY2多克隆抗体精品推荐

兔抗LEFTY2多克隆抗体精品推荐蛋白印记Western blot使用
样品裂解
1. 制备细胞培养物裂解物

将细胞培养皿置于冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。
吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；每 5×106 细胞/60 mm 培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml）。
用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。
在 4 ℃ 下持续搅拌 30 分钟。
在 4 ℃ 预冷的离心机中以 16,000 × g 的转速离心 20 分钟。
轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中，弃去沉淀。


2. 制备组织裂解物

用干净的工具切取目标组织，此操作最好在冰上进行，并且应尽快完成，以防止样品被蛋白酶降解。
将组织置于圆底微量离心管或 Eppendorf 管中，并浸入液氮中进行“速冻”。将样品保存在 -80 ℃ 下以备后续使用，或放置在冰上直接进行匀浆。对于约 5 mg 的组织，向离心管中快速加入约 300 μL 裂解缓冲液，然后用电动匀浆器进行匀浆，用另外 300 μL 裂解缓冲液冲洗刀片两次，然后在 4 ℃ 下持续搅拌（例如，在回旋振荡器上）2 小时。
4 ℃ 下在微型离心机中以 16,000 × g 离心 20 分钟。轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中。弃去沉淀。


样品制备

取出小部分 (50 μL) 裂解物，用于蛋白分析。确定每种细胞裂解物的蛋白浓度。
向剩余体积的细胞裂解物中加入等体积的 2× Laemmli 样品缓冲液。我们推荐采用以下方法来还原样品和使样品变性，除非在线抗体数据表指明应使用非还原和非变性条件。
还原和变性：在 100 ℃ 下将样品缓冲液中的每种细胞裂解物煮沸 5 分钟，并进行分装。在 -20 °C 下保存裂解物。注意：分装细胞裂解物 (50 - 100 μL)，避免反复冻融循环。
在 37 ℃ 下解冻装有细胞裂解物的离心管。在微型离心机中以 16,000 × g 离心 5 分钟。

膜可以是硝酸纤维素或 PVDF，两者各具优点。用甲醇“活化”PVDF 1 分钟，并在制备堆叠体之前用转膜缓冲液冲洗 PVDF。可能需要对时间和电压进行一些优化。我们推荐按照产品说明进行操作。可在封闭步骤之前用丽春红染色法检查转膜。

所得膜可用于抗体染色。
在 Western 印迹膜上完成了一抗二抗结合和后续化学发光检测后，往往还需要检测 Actin 和 Tubulin 等表达相对稳定的内参蛋白质或其他蛋白。我司产品Western 印迹膜抗体清除剂可以使印迹膜上的、与靶蛋白质结合的一抗二抗从膜上脱落，这样同一张膜可以用于不同的检测反应，比重新跑一块 SDS-PAGE 更省时省力，同时数据间可比性更强。
本产品具有下列特点:
1. 简单快速，整个过程只需要 30 分钟左右。
2. 不破坏膜上的蛋白抗原，不导致蛋白信号的减弱。
3. 可以反复使用 2-4 次。

兔抗LEFTY2多克隆抗体精品推荐保存注意事项。作为蛋白质试剂，条件得当，一般都可以保存几个月到几年。对于大部分抗体而言，分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的长期保存条件。
抗体标记服务
1、可接收的待标记样品包含抗体IgG、大分子蛋白、小分子多肽、小分子化合物等。
2、可提供标记服务的标记物有：
A.酶标记物：碱性磷酸酶（AP/ALP），辣根过氧化物酶（HRP）；
B.生物素（Biotin）；
C.常规荧光素：FITC，Rhodamine B（RBITC）；
D.Cy系列荧光素：Cy3，Cy5，Cy5.5，Cy7；
E.荧光蛋白：藻红蛋白（PE），别藻蓝蛋白（APC）；
F.荧光双标记：

PE-Cy荧光素系列：PE-Cy3，PE-Cy5，PE-Cy5.5，PE-Cy7；
APC-Cy荧光素系列：APC-Cy3，APC-Cy5，APC-Cy5.5，APC-Cy7；
PerCP-Cy荧光素系列：PerCP-Cy3，PerCP-Cy5，PerCP-Cy5.5，PerCP-Cy7；
G.胶体金标记Co-Au。