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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
LS513
- 库存:
100
- 供应商:
上海富雨
- 肿瘤类型:
.
- 细胞类型:
详见说明
- 品系:
培养基:RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-500)+1% P/S(PB180120)
- 组织来源:
详见说明
- 相关疾病:
详见说明
- 物种来源:
ATCC、DSMZ、ECACC、中科院等
- 免疫类型:
详见说明
- 细胞形态:
上皮细胞样
- 是否是肿瘤细胞:
.
- 器官来源:
详见说明
- 运输方式:
常温或者干冰
- 年限:
详见说明
- 生长状态:
贴壁
| 细胞传代步骤: | 如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
| 细胞复苏步骤: | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞冻存步骤: | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 细胞运输: | 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25细胞瓶) |
显微镜下部分细胞产品的形态:
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文献和实验RAW 264.7细胞攻略 | 巨噬细胞研究的"标准工具",从培养到实验的避坑指南
鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞 细胞类型:肿瘤细胞 肿瘤类型:白血病细胞 生物安全等级:BSL-2 抗原/受体表达:H-2d; complement (C3) 基因表达:lysozyme, H-2d; 鼠痘病毒(ectromelia virus)检测阴性 保藏机构:ATCC(TIB-71); ECACC(91062702) STR鉴定是确保细胞身份的关键。该细胞系经STR鉴定正确,为实验数据的可重复性提供了坚实基础。其生长特性为贴壁生长,细胞形态呈不规则形
,能发现替代起始产生的截短体。 框内突变:蛋白只是略小,条带轻微下移,容易被误读为"没变化"。 补充手段 流式/免疫荧光:能看到单细胞水平的均一性,群体 Western 看不到的异质性在这里会暴露; 若抗体不可用,可用 RNA 水平 + 功能读数替代,但要在报告中说明。 细胞株基础质量检查 支原体检测:必须做,支原体污染会系统性改变细胞表型; 细胞身份鉴定(STR):确认细胞株没有搞混或被交叉污染; 代次与冻存记录:确认是低代次; 形态与生长曲线是否正常。 --- 第四层:功能验收与克隆效应
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