- ￥1180
- FUYUBIO
- 国产/进口
- FY-PR3226
- 2025年10月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
A172
- 库存：
100
- 供应商：
上海富雨
- 肿瘤类型：
.
- 细胞类型：
详见说明
- 品系：
培养基：DMEM(PM150210)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)
- 组织来源：
详见说明
- 相关疾病：
详见说明
- 物种来源：
ATCC、DSMZ、ECACC、中科院等
- 免疫类型：
详见说明
- 细胞形态：
成纤维细胞样
- 是否是肿瘤细胞：
.
- 器官来源：
详见说明
- 运输方式：
常温或者干冰
- 年限：
详见说明
- 生长状态：
贴壁
| 细胞传代步骤： | 如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 |
| 细胞复苏步骤： | 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞冻存步骤： | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 细胞运输： | 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输（T25细胞瓶） |
显微镜下部分细胞产品的形态： 
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文献和实验据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识，因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……，这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增，电泳确认 PCR 产物大小，对大小正确的产物进行测序，如测序结果与理论序列一致，则确认该基因编辑小鼠模型为正确重组模型。 TIPS 双臂 PCR 产物需测通：我们在实践中发现，即使 Donor 序列完全正确，部分鼠会存在突变或片段缺失的情况，我们推测是细胞在 Donor 重组前或过程中对 Donor 发生了编辑或重组后结构不稳定等原因所致，所以只对 Donor 各个部分接头测序是不严谨的，建议测通。 下面以 CKO 模型鉴定为例说明双臂 PCR 鉴定
短串联重复序列（short tandem repeat，STR），又称为微卫星DNA ，重复单位为2-6bp，重复次数10~60多次，在DNA复制过程中的滑动、复制、修复过程中滑动链与互补链的碱基错配，从而导致一个或几个重复单位的缺失或插入，形成STR的多态性，主要应用于遗传连锁图谱分析、家系鉴定、身份认证等领域，同时也是鉴定细胞株被错误识别和交叉污染的主要工具。细胞株被错误识别及交叉污染的现象还是比较普遍的，虽然科研工作者使用各种各样的传统方法来鉴定细胞，但细胞交叉污染的问题却有增无减
