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- YBio/钰博生物
- YB-718200-15
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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大量
- 英文名：
Marek’s Disease Virus(MDV) Probe qPCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Marek’s Disease Virus(MDV) Probe qPCR Kit
马 立 克 氏 病 (Marek's disease,MD) 是 由 鸡 马 立 克 氏 病 病 毒 (Marek's
disease virus,MDV)引起的一种鸡的淋巴组织增生性肿瘤病，其特征为外周神经
淋巴样细胞浸润和增大，引起肢（翅）麻痹，以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉
和皮肤肿瘤病灶。本病是一种世界性疾病，目前是危害养鸡业健康发展的三大主
要疫病（马立克氏病、鸡新城疫及鸡传染性法氏囊病）之一，引起鸡群较高的发
病率和死亡率。因此快速灵敏检测马立克氏病病毒具有重要意义。本产品就是为
此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据马立克氏病病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的
DNA 发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR Magic Mix | 500μL（本色盖） |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（黄盖） |
| 试剂三 | 马立克氏病病毒探针法qPCR引物混合液 | 100μL（白盖） |
| 试剂四 | 马立克氏病病毒qPCR探针 | 50μL（棕色管） |
| 试剂五 | 马立克氏病病毒探针法qPCR阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50μL（黄盖） |
| 试剂六 | 天净沙核酸释放剂（试用装） | 20 次（1mL，绿盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期12个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品
（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性对照管 | 标准曲线样品管（2-7 管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
| 马立克氏病病毒qPCR 探针 | 1μL | 1μL | 各 1μL |
| 马立克氏病病毒探针法qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
| N+2 个待测 DNA 模板 | 7 μL | 不加 | 不加 |
| 超纯水 | 不加 | 7 μL | 不加 |
| 第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） | 不加 | 不加 | 各7μL（2号样到2号管，3 号样到3号管…） |
11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （40 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 60℃ |
60sec（采集 FAM 通道的荧 光信号） |
四、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct
值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品
RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大
于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该
小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小
于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct
值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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文献和实验荧光定量PCR的应用 分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证3 、SNP 检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体
RNase H活性缺失的莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV Reverse Transcriptase)的高效反转录合成单链cDNA的试剂盒； All-in-One? qPCR Mix 基于SYBR Green的All-in-One? qPCR 检测试剂盒； All-in-One? miRNA qRT-PCR Detection Kit 采用Poly A加尾法的miRNA qPCR 检测试剂盒；
实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
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