猪种特异性基因核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

猪种特异性基因核酸检测试剂盒（荧光PCR法）客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
    10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM）   
              2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
  1 μl      加ddH2O至 50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

Renin ELISA Kit   大鼠肾素     96T
ANX- V ELISA Kit  大鼠膜联蛋白Ⅴ     96T
sIgA(Mouse secretory immunoglobulin A) ELISA Kit  小鼠分泌型免疫球蛋白A     96T
HO-2(Mouse heme oxygenase 2) ELISA Kit  小鼠血红素氧合酶2     96T
AECA ELISA Kit  大鼠抗内皮细胞抗体     96T
i-PTH ELISA Kit  大鼠全段甲状旁腺素     96T
CED-3(Human caenorhabditis elegans death gene) ELISA Kit  人美丽线虫凋亡基因     96T
Cr(Mouse Crosslaps) ELISA Kit  小鼠骨胶原交联     96T
TLa(Human thymus-leukemia antigen) ELISA Kit  人胸腺白血病抗原     96T
FSH(mouse follicle-stimulating hormone) ELISA Kit  小鼠促卵泡素     96T
CIAP ELISA Kit  大鼠牛小肠碱性磷酸酶     96T
SP-A ELISA Kit  大鼠肺表面活性物质相关蛋白A     96T
C I (Mouse cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit  小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽     96T
TSTA(Human tumor specific transplantation antigen) ELISA Kit  人肿瘤特异性移植抗原     96T
DPD(Mouse deoxypyridinoline) ELISA Kit  小鼠脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉     96T
PCX(Human Podocalyxin) ELISA Kit  人足细胞标记蛋白/足盂蛋白     96T
CC16 ELISA Kit   大鼠克拉拉细胞蛋白     96T
猪种特异性基因核酸检测试剂盒（荧光PCR法）EPI ELISA Kit  大鼠     96T
PY(Mouse pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit  小鼠吡啶交联物     96T
BRCA-1(Human breast cancer susceptibility protein 1) ELISA Kit  人乳腺癌易感蛋白1     96T
TALLA-1/CD231(Human T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen) ELISA Kit  人T细胞急性淋巴母细胞白血病相关抗原     96T
OPN(Mouse Osteopontin) ELISA Kit  小鼠骨桥素     96T
MPO-ANCA IgG ELISA Kit  大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG     96T
C3 ELISA Kit  大鼠补体蛋白3     96T
Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins) ELISA Kit  人核仁形成区嗜银蛋白     96T
ACTH(mouse adrencocorticotropic hormone) ELISA Kit  小鼠促肾上腺皮质激素     96T
AZT ELISA Kit  大鼠叠氮胸苷     96T
ALP-B(Mouse Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit  小鼠骨特异性碱性磷酸酶B     96T
Trx(Human Thioredoxin) ELISA Kit  人硫氧化还原蛋白     96T
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的： 1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。 2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。