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狂犬病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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  • 上海研生
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  • 2025年07月15日
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    • 供应商

      上海研生

    • 规格

      50T

    狂犬病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
    PCR实验方法步骤:
    方法
    1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
        10×PCR buffer 
                      5 μl     dNTP mix (2mM)   
              4 μl     引物1(10pM)   
                  2 μl     引物2(10pM) 
                    2 μl     Taq酶 (2U/μl)
                    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl) 
      1 μl      加ddH2O至 50 μl
       视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
    2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
    3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
    产品特点:
    灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
    特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
    稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
    扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
    产品细节图片1
    PTHrP(Mouse Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit  小鼠甲状旁腺激素相关蛋白     96T
    Col I (Human Collagen Type I ) ELISA Kit  人Ⅰ型胶原     96T
    P I (Human procollagen III N-terminal peptide) ELISA Kit  人Ⅰ型前胶原羧基端肽     96T
    LPA(Mouse L-phenylalanine) ELISA Kit  小鼠苯丙氨酸     96T
    MTL ELISA Kit  大鼠胃动素     96T
    Beta-EP ELISA Kit  大鼠β内啡肽     96T
    HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit  人透明质酸     96T
    ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit  小鼠抗心磷脂抗体IgA     96T
    ACA-IgM(Mouse anti-cardiolipin antibody IgM) ELISA Kit  小鼠抗心磷脂抗体IgM     96T
    Col IV (Human Collagen Type IV ) ELISA KIT  人Ⅳ型胶原     96T
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    Fbg ELISA Kit  大鼠血纤蛋白原     96T
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    AP12(Mouse apelin 12) ELISA Kit  小鼠apelin 12     96T
    LN(Human Laminin) ELISA KIT  人层连蛋白/板层素     96T
    sm Actinin- Alpha ELISA Kit  大鼠横纹肌辅肌动蛋白α     96T
    狂犬病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)FN(Human Fibronectin) ELISA Kit  人纤连蛋白     96T
    IFN- Alpha(Mouse Interferon Alpha) ELISA Kit  小鼠α干扰素     96T
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    Mouse rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit  小鼠的牛血清白蛋白残留检测     96T
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    tTG-IgA(Human Anti-tissue transglutaminase IgA) ELISA kit  人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA     96T
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    MHC I /AgB I /H-1 I ELISA Kit  大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类     96T
    GATA4 ELISA Kit  大鼠GATA结合蛋白4     96T
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    PsmAb(Human anti-presynaptic membrane antibody) ELISA Kit  人抗突触前膜抗体     96T
    AT2R-Ab(Human Angiotensin II Receptor 2 antibody) ELISA Kit  人血管紧张素Ⅱ受体2抗体     96T
    TSST-1(Mouse toxic shock syndrome toxin) ELISA Kit  小鼠毒性休克综合征毒素1     96T
    NP-Y ELISA Kit  大鼠神经肽Y     96T
    GHRP ELISA Kit  大鼠生长激素释放多肽     96T实时荧光定量PCR:
    实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
    定量PCR方法:
    a、竞争法
    选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 b、内参照法
    在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
    c、PCR-ELISA法
    利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。

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