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详见说明书
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
详见说明书
- 库存:
100
- 供应商:
上海研生
- 规格:
50T
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
产品特点:
灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
PTHrP(Mouse Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit 小鼠甲状旁腺激素相关蛋白 96T
Col I (Human Collagen Type I ) ELISA Kit 人Ⅰ型胶原 96T
P I (Human procollagen III N-terminal peptide) ELISA Kit 人Ⅰ型前胶原羧基端肽 96T
LPA(Mouse L-phenylalanine) ELISA Kit 小鼠苯丙氨酸 96T
MTL ELISA Kit 大鼠胃动素 96T
Beta-EP ELISA Kit 大鼠β内啡肽 96T
HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit 人透明质酸 96T
ACA-IgA(Mouse anti-cardiolipin antibody IgA) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗体IgA 96T
ACA-IgM(Mouse anti-cardiolipin antibody IgM) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗体IgM 96T
Col IV (Human Collagen Type IV ) ELISA KIT 人Ⅳ型胶原 96T
SS ELISA Kit 大鼠生长抑素 96T
Fbg ELISA Kit 大鼠血纤蛋白原 96T
Col III (Human Collagen Type III ) ELISA KIT 人Ⅲ型胶原 96T
ACA-IgG(Mouse anti-cardiolipin antibody IgG) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗体IgG 96T
AP12(Mouse apelin 12) ELISA Kit 小鼠apelin 12 96T
LN(Human Laminin) ELISA KIT 人层连蛋白/板层素 96T
sm Actinin- Alpha ELISA Kit 大鼠横纹肌辅肌动蛋白α 96T
狂犬病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)FN(Human Fibronectin) ELISA Kit 人纤连蛋白 96T
IFN- Alpha(Mouse Interferon Alpha) ELISA Kit 小鼠α干扰素 96T
MYS ELISA Kit 大鼠肌球蛋白 96T
Mouse rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit 小鼠的牛血清白蛋白残留检测 96T
Des ELISA Kit 大鼠结蛋白 96T
Nogo-A Ab(Human anti-Nogo-A antibody) ELISA Kit 人NOGO-A抗体 96T
tTG-IgA(Human Anti-tissue transglutaminase IgA) ELISA kit 人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA 96T
CA724(Mouse CA724) ELISA Kit 小鼠肿瘤标志物 96T
MHC I /AgB I /H-1 I ELISA Kit 大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类 96T
GATA4 ELISA Kit 大鼠GATA结合蛋白4 96T
F II (Mouse coagulation factor II ) ELISA Kit 小鼠凝血因子Ⅱ 96T
Surv(Human anti-Survivin antibody) ELISA Kit 人抗存活素抗体/生存蛋白 96T
IP-10/CXCL10 ELISA Kit 大鼠干扰素诱导蛋白10 96T
ET(Mouse endotoxin) ELISA Kit 小鼠内毒素 96T
GM-CSF Ab(Human anti-Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor antibody) ELISA Kit 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体 96T
ANP(Mouse Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit 小鼠心钠肽 96T
ENA-78/CXCL5 ELISA Kit 大鼠上皮中性粒细胞活化肽78 96T
TTN(Human Anti-titin Antibody) ELISA Kit 人抗肌联蛋白抗体 96T
AT- III ELISA Kit 大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体 96T
PPAR- Gamma(Mouse Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit 小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ 96T
PsmAb(Human anti-presynaptic membrane antibody) ELISA Kit 人抗突触前膜抗体 96T
AT2R-Ab(Human Angiotensin II Receptor 2 antibody) ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ受体2抗体 96T
TSST-1(Mouse toxic shock syndrome toxin) ELISA Kit 小鼠毒性休克综合征毒素1 96T
NP-Y ELISA Kit 大鼠神经肽Y 96T
GHRP ELISA Kit 大鼠生长激素释放多肽 96T实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确,重现性定量方法,已得到全世界的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,最终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
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文献和实验LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
的定量。 更多有关特定CpG位点的甲基化的详细信息,可采用重亚硫酸氢盐修饰后测序分析。 LightCycler主要应用:实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析 我们使用罗氏诊断公司的LightCycler®480高分辨熔解扩增试剂盒在LightCycler®480实时荧光PCR仪上,通过MS-HRM测定法对两种已知的经过启动子(FANCE和MGMT)甲基化的DNA修复基因的检测性能。 材料和方法 将多种细胞株的DNA样本作为检测模板。每μg的每种DNA样本都经过重亚硫酸盐修饰
本文主要介绍 ELISA 试剂盒、实验样本、相关问题,帮助大家更好地开展实验 试剂盒 Q1:科研试剂盒与临床试剂盒的区别 ? A1:临床试剂是经过权威机构认可的,如 FDA、CFDA 等;而科研试剂一般是厂家自主研制,不需要通过权威机构验证。 经营临床诊断类产品的机构需要取得《医疗器械经营企业许可证》;经营科研试剂的机构不需要此证件。 临床试剂盒一般仅用于检测人血清/血浆等较为单一的分泌性样本类型;科研试剂盒的样本检测种类、检测范围则比临床试剂盒宽广得多。但一般来说,临床试剂盒的质量
针对同一指标,生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗?
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律,但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应,其反应过程可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图,如下所示: 延迟区:无规律可寻。 等速区:对应的是速率法,一般应用于酶活力的检测。 过渡区:对应的是固定时间法,目的是解决某些化学反应的非特异性问题,提高准确度。 平衡区:对应的是终点法,主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
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