立克次体核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

立克次体核酸检测试剂盒（荧光PCR法）客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
    10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM）   
              2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
  1 μl      加ddH2O至 50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

VB6(Human Vitamin B6) ELISA Kit  人维生素B6     96T
sP-selectin(Human soluble P-selectin) ELISA Kit  人可溶性P选择素     96T
TIMP-1(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1) ELISA Kit  人基质金属蛋白酶抑制因子1     96T
VD(Human Vitamin D) ELISA Kit  人维生素D     96T
VK1(Human Vitamin K1) ELISA Kit  人维生素K1     96T
VB12(Human Vitamin B12) ELISA Kit  人维生素B12     96T
VD3(Human Vitamin D3) ELISA kit  人维生素D3     96T
VD2(Human Vitamin D2) ELISA Kit  人维生素D2     96T
VE(Human Vitamin E) EELISA Kit  人维生素E     96T
VA(Human Vitamin A) ELISA Kit  人维生素A     96T
GEF(Human Guanine Exchange Factor) ELISA Kit  人鸟苷酸交换因子     96T
VD R(Human Vitamin D Receptor) ELISA Kit  人维生素D受体     96T
TSST-1(Human toxic shock syndrome toxin) ELISA Kit  人毒性休克综合征毒素1     96T
SE(Human staphylococcus aureus enterotoxins) ELISA Kit  人金葡菌肠毒素     96T
立克次体核酸检测试剂盒（荧光PCR法）CNX(Human calnexin) ELISA Kit  人钙联蛋白     96T
MIS/AMH(Human Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone) ELISA Kit  人缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素     96T
BTC(Human beta cellulin) ELISA Kit  人β细胞素     96T
FETU-A(Human Fetuin A) ELISA Kit  人胎球蛋白A     96T
HPRI(Human placental ribonuclease inhibitor) ELISA Kit  人胎盘核糖核酸抑止剂     96T
PP(Human placental protein) ELISA Kit  人胎盘蛋白     96T
HPL(Human placenta lactogen) ELISA Kit  人胎盘催乳素     96T
HBF(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit  人胎儿血红蛋白     96T
anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit  人抗巨细胞病毒抗体IgM     96T
anti-tox IgM(Human anti-toxoplasma IgG antibody) ELISA Kit  人抗弓形体IgM抗体     96T
anti-RV IgG(Human anti-rubella virus IgG antibody) ELISA Kit  人抗风疹病毒IgG抗体     96T
EBV(Human anti-Epstein-Barr virus antibody) ELISA Kit  人抗EB病毒抗体     96T
PGR(Human progesterone receptor) ELISA Kit  人孕酮受体     96T
N-TSH(Human Neonatal Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit  人新生儿促甲状腺素     96T
SP1/PS Beta1-G(Human Pregnancy Specific Beta1Glycoprotein) ELISA Kit  人妊娠特异性β1糖蛋白     96T
PL(Human placetal lactogen) ELISA Kit  人胎盘泌乳素     96T
ABP(Human Androgen Binding Protein) ELISA Kit  人雄激素结合蛋白     96T
ATA(Human anti-trophoblast antibody,ATA ) ELISA Kit  人抗滋养膜细胞抗体     96T
aZP(Human anti-zona pellucida antibody,aZP) ELISA Kit  人抗透明带抗体     96T
AOAb(Human Anti-Ovary Antibody,AOAb) ELISA Kit  人抗卵巢抗体     96T
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的： 1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。 2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。