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100
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上海研生
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50T
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荧光定量PCR原理:
荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间EGFRvIII 表皮生长因子受体III型突变体抗原 0.5mg
CD26 CD26抗原 0.5mg
ABCG1 peptide 三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗原 0.5mg
Cardiac Troponin T 心肌特异性肌钙蛋白T 0.5mg
BACE( ASP2 ) β分泌酶(抗原) 0.5mg
ABL1(v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1) ABL1抗原 0.5mg
FUCA1/Alpha L fucosidase I peptide α-L岩藻糖苷酶抗原 0.5mg
Rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记兔IgG(细胞流式同型对照) 0.1ml
Bassoon(BSN) 0.5mg
Bax peptide Bax(多肽抗原) 0.5mg
Leptin peptide/FITC 荧光素FITC标记瘦素抗原 1mg
Bcl-2(抗原) Bcl-2(多肽抗原) 0.5mg
BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 脑源神经营养因子(脑衍化神经营养因子)(多肽片断抗原) 0.5mg
ACA11 peptide 拟南芥ACA11蛋白多肽抗原 0.5mg
AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(拟南芥) 0.5mg
bFGF 碱性成纤维细胞生长因子(多肽抗原) 0.5mg
ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管紧张素转换酶2抗原 0.5mg
BNP 脑钠素(多肽抗原) 0.5mg
BNP/Biotin 生物素化脑钠素多肽 0.2ml
BrdU (Bromodeoxyuridine) 溴脱氧尿苷 50mg
C5 过敏毒素C5(补体C5)抗原 0.5mg
马流感病毒(EIV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)CA125 卵巢癌抗原 0.2mg
CK19 细胞角蛋白19抗原 0.5mg
CAD(Caspase-Activated Deoxyribonuclease) Caspase 激活的脱氧核糖核酸酶(抗原) 0.5mg
MYOG 肌红蛋白抗原 0.5mg
Calponin 1 钙调节蛋白-1(抗原) 0.5mg
COMP 软骨寡聚基质蛋白抗原 0.5mg
Caspase-1 (ICE; CASP-1;P45) 天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族(抗原) 0.5mg
Caspase-3 (P32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原) 0.5mg
Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mg
Caspase-6 (CT) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-6(抗原) 0.5mg存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。
特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除TIANDZ公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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文献和实验。临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足,基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下,利用现有的试剂研发平台,人感染猪流感实时荧光定量PCR诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量PCR技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前,针对猪与猪传染的传统猪流感疫情,近年来我国科技人员经过不懈努力,探索快速检测与诊断方法].人感染猪流感疫情发生后,美国疾病预防控制中心(CDC)于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南
是一项新型的核酸扩增技术,一小时内可以检测出IHHNV结果。广州双螺旋基因技术有限公司根据恒温PCR原理,研发出Dhelix-C水产病害检测仪,配合使用恒温荧光法IHHNV核酸检测试剂盒,在65°C的恒温条件下反应,利用Bst DNA聚合酶完成置换扩增。反应体系中含有荧光染料,Dhelix-C水产病害检测仪能通过光学软件检测扩增后荧光信号的变化,将荧光信号表达为扩增曲线,同时仪器自动判读检测结果,从取样到结果显示仅需1~2个小时,仪器操作简单,非专业背景人员也可以轻松掌握,更适用于对虾IHHNV现场
余种。值得注意的是:该公司2009年6月先后通过甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的质量管理体系考核、取得甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的注册受理通知书。2009年6月17日国家食品药品监督管理局医疗器械监管司王宝亭司长、王兰明专员光临我公司并对甲型H1N1流感病毒检测试剂盒文号申报工作进行指导。2009年6月首批428套甲型H1N1流感病毒检测试剂盒配发至全国213个流感检测网络实验室PS:今年甲型流感这一试剂的开发和应用,让金豪公司赚得盆满钵满
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