幽门螺旋杆菌PCR试剂盒

产品简介：
幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件 要求十分苛刻的细菌，也是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类， 该细菌会引起幽门螺杆菌病，包括由幽门螺杆菌感染引起的胃炎、消化道溃 疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。慢性胃炎和消化道溃疡患者的普遍症状为：食 后上腹部饱胀、不适或疼痛，常伴有其他不良症状，如嗳气、腹胀、反酸和食 欲减退等。有些患者还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。 据此，专家们认为，及早发现幽门螺杆菌感染者，及时而有效地用抗菌素杀 灭幽门螺杆菌，对预防和控制胃癌有重大意义，因此快速检测幽门螺旋杆菌 具有重要意义。本产品是根据 PCR 原理开发的幽门螺旋杆菌检测试剂盒，它 具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增幽门螺旋杆菌，与其他病原没有交
叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
幽门螺旋杆菌PCR 引物混合液	13-29930yw	100 μL（白盖）
幽门螺旋杆菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-29930pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-29930sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌 DNAout，其使用手册可以从本公 司网站搜索产品名称或产品编号 60802-50 下载。 2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 幽门螺旋杆菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释 液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
幽门螺旋杆菌PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（幽门螺旋杆菌PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	25sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。