转基因构建FMV启动子-PVY基因染料法qPCR试剂盒

转基因构建FMV启动子-PVY基因染料法qPCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

ACE2  血管紧张素转换酶2抗体     0.1ml
ACEI  血管紧张素1转换酶抑制剂抗体     0.1ml
Acetyl CoA Carboxylase  乙酰辅酶A羧化酶抗体     0.2ml
Phospho-Acetyl CoA Carboxylase(Ser79)  磷酸化乙酰辅酶A羧化酶抗体     0.1ml
ACD  肾上腺皮质发育异常蛋白抗体     0.2ml
ACHE/Acetylcholinesterase  乙酰胆碱酶抗体     0.1ml
Acinus  Acinus抗体     0.2ml
phospho-Acinus(Ser1180)  磷酸化腺泡Acinus蛋白抗体     0.1ml
Ack1  醋酸激酶1抗体     0.2ml
Phospho-Ack1(Tyr859/860)  磷酸化Ack1抗体     0.1ml
Phospho-Ack1(Tyr284)  磷酸化Ack1抗体     0.1ml
Phospho-Ack1(Tyr326)  磷酸化Ack1抗体     0.1ml
ACSL1  长链脂肪酸辅酶A连接酶1/2抗体     0.2ml
ACTH (1-39)  促肾上腺皮质激素(1-39)抗体     0.1ml
Phospho-MKP1 (Ser318)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1抗体     0.1ml
ACTH (18-39)  促肾上腺皮质激素ACTH(18-39)抗体     0.1ml
ACTH (7-23)  促肾上腺皮质激素ACTH (7-23)抗体     0.1ml
Actin α/alpha-SMA  肌动蛋白α(α-SMA)抗体     0.1ml
Sarcomeric Alpha Actinin/ACTN2  α横纹肌辅肌动蛋白/α-SCA抗体     0.1ml
alpha Actinin 4  α-辅肌动蛋白4抗体     0.2ml
F-Actin  纤维状肌动蛋白抗体     0.1ml
ACOT8  酰基辅酶A硫酯酶8     0.2ml
Agpat2  溶血磷脂酸酰基转移酶β抗体     0.2ml
AGPAT4  溶血磷脂酸酰基转移酶D抗体     0.2ml
phospho-SYT1(Thr202)  磷酸化突触结合蛋白1抗体     0.1ml
Synaptotagmin 1/SYT1  突触结合蛋白1抗体     0.2ml
phospho-SYT1(Ser309)  磷酸化突触结合蛋白1抗体     0.1ml
phospho-SYN1(Ser549)  磷酸化神经突触素1抗体     0.1ml
转基因构建FMV启动子-PVY基因染料法qPCR试剂盒phospho-SYN1(Ser603)   磷酸化神经突触素1抗体     0.1ml
phospho-SYN1(Ser62+Ser67)  磷酸化神经突触素1抗体     0.1ml
AD7c-NTP  神经丝蛋白抗体     0.2ml
ADAMTS2  整合素样金属蛋白酶与凝血酶2型抗体     0.2ml
AD7C-NTP(human)  神经丝蛋白抗体（人）     0.2ml
AD7C-NTP  神经丝蛋白抗体     0.2ml
5HTR3B/5HT3B receptor  5-羟色胺受体3B抗体     0.1ml
CDC37  Hsp90辅助伴侣分子CDC37抗体     0.1ml
ADAMTS1  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型抗体     0.1ml
ADAMTS4  整合素样金属蛋白酶与凝血酶4型抗体     0.1ml
SLC25A20  线粒体二羧酸载体蛋白20抗体     0.1ml
P2Y2  嘌呤ATP受体抗体     0.2ml
PIH1D1/NOP17  核仁同源蛋白17抗体     0.2ml
Vesicle docking protein p115  囊泡对接蛋白p115抗体     0.2ml
ADAMTS7  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体     0.1ml
BRLF1  EBV立即早期基因BRLF1抗体     0.2ml
Cancer/testis antigen 1B/1A  肿瘤/睾丸抗原1B/1A     0.2ml
ADAMTS7(NT)  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 (N端抗体)     0.1ml
CTAG1B/Cancer/testis antigen 1  肿瘤/睾丸抗原1B     0.2ml
ADAMTS8  整合素样金属蛋白酶与凝血酶8型抗体     0.2ml实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。