转基因构建FMV启动子-PLRY基因LAMP试剂盒

转基因构建FMV启动子-PLRY基因LAMP试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
G蛋白调节诱导神经突增生蛋白1抗体    INα ELISA Kit    互联蛋白神经元中间丝蛋白α(INα)ELISA试剂盒
G蛋白调节诱导神经突增生蛋白3抗体    SUCNR1 ELISA Kit    琥珀酸受体1(SUCNR1)ELISA试剂盒
颗粒溶素抗体    EPYC ELISA Kit    骺蛋白聚糖(EPYC)ELISA试剂盒
GTP酶IMAP家族成员6抗体    GRIK2 ELISA Kit    红藻氨酸离子能谷氨酸受体2(GRIK2)ELISA试剂盒
γ-谷氨酰羧化酶抗体    NFE2L2 ELISA Kit    红细胞衍生核因子2样蛋白2(NFE2L2)ELISA试剂盒
鸟嘌呤核苷酸结合蛋白9抗体    STOM ELISA Kit    红细胞膜蛋白7.2b(STOM)ELISA试剂盒
GEM相互作用蛋白抗体    CR1 ELISA Kit    红细胞补体受体1(CR1)ELISA试剂盒
谷胱甘肽硫转移酶C段结构域抗体    HAP1 ELISA Kit    亨廷顿关联蛋白1(HAP1)ELISA试剂盒
糖基转移酶样1抗体    HTT ELISA Kit    亨廷顿蛋白(HTT)ELISA试剂盒
促进成骨细胞分化因子抗体    MFI2 ELISA Kit    黑素转铁蛋白(MFI2)ELISA试剂盒
甘油磷酸二酯酶磷酸结构域3抗体    MREG ELISA Kit    黑素曲菌素(MREG)ELISA试剂盒
γ-谷氨酰基环转移酶抗体    MLPH ELISA Kit    黑素亲和素(MLPH)ELISA试剂盒
生长分化因子8/肌肉抑制素抗体    MC5R ELISA Kit    黑素皮质激素5受体(MC5R)ELISA试剂盒
鹅细小病毒GPV抗体    MC4R ELISA Kit    黑素皮质激素4受体(MC4R)ELISA试剂盒
胃泌素/蛙皮素抗体    MC3R ELISA Kit    黑素皮质激素3受体(MC3R)ELISA试剂盒
3-磷酸甘油醛脱氢酶    MIA1 ELISA Kit    黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)ELISA试剂盒
胶质细胞源性神经营养因子抗体    MCAM ELISA Kit    黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)ELISA试剂盒
β半乳糖苷酶抗体    AIM2 ELISA Kit    黑素瘤缺乏因子2(AIM2)ELISA试剂盒
gamma氨基丁酸B型受体1抗体    AIM1 ELISA Kit    黑素瘤缺乏因子1(AIM1)ELISA试剂盒
G蛋白/鸟苷酸结合蛋白抗体    PRAME ELISA Kit    黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)ELISA试剂盒
GDNF家族受体α4抗体 GDNFRα4    MCSP ELISA Kit    黑色素瘤关联硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)ELISA试剂盒
神经节肽抗体    ME20M ELISA Kit    黑色素瘤关联ME20(ME20M)ELISA试剂盒
谷氧还蛋白/巯基转移酶抗体    MCHR1 ELISA Kit    黑色素聚集激素受体1(MCHR1)ELISA试剂盒
G蛋白偶联受体GPR113蛋白抗体    MLANA ELISA Kit    黑色素A(MLANA)ELISA试剂盒
甘丙肽受体1抗体    HPS6 ELISA Kit    赫曼斯基普德拉克综合征蛋白6(HPS6)ELISA试剂盒
生长抑制DNA损伤基因34抗体    NFYC ELISA Kit    核转录因子Y亚基γ(NFYC)ELISA试剂盒
生长分化因子1抗体    NUMA1 ELISA Kit    核有丝分裂器蛋白1(NUMA1)ELISA试剂盒
葡萄糖激酶抗体    NFRkB ELISA Kit    核因子相关κB结合蛋白(NFRkB)ELISA试剂盒
G蛋白偶联受体78抗体    IκBβ ELISA Kit    核因子κB抑制因子β(IκBβ)ELISA试剂盒
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。