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- 2025年07月06日
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低温冷藏
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详见说明书
- 英文名：
详见说明书
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 规格：
50T
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号 反应物 剂量 1 逆转录buffer 2μl
2 上游引物 0.2μl
3 下游引物 0.2μl
4 dNTP 0.1μl
5 逆转录酶MMLV 0.5μl
6 DEPC水 5μl
7 RNA模版 2μl
8 总体积 10μl
G蛋白调节诱导神经突增生蛋白1抗体 INα ELISA Kit 互联蛋白神经元中间丝蛋白α(INα)ELISA试剂盒
G蛋白调节诱导神经突增生蛋白3抗体 SUCNR1 ELISA Kit 琥珀酸受体1(SUCNR1)ELISA试剂盒
颗粒溶素抗体 EPYC ELISA Kit 骺蛋白聚糖(EPYC)ELISA试剂盒
GTP酶IMAP家族成员6抗体 GRIK2 ELISA Kit 红藻氨酸离子能谷氨酸受体2(GRIK2)ELISA试剂盒
γ-谷氨酰羧化酶抗体 NFE2L2 ELISA Kit 红细胞衍生核因子2样蛋白2(NFE2L2)ELISA试剂盒
鸟嘌呤核苷酸结合蛋白9抗体 STOM ELISA Kit 红细胞膜蛋白7.2b(STOM)ELISA试剂盒
GEM相互作用蛋白抗体 CR1 ELISA Kit 红细胞补体受体1(CR1)ELISA试剂盒
谷胱甘肽硫转移酶C段结构域抗体 HAP1 ELISA Kit 亨廷顿关联蛋白1(HAP1)ELISA试剂盒
糖基转移酶样1抗体 HTT ELISA Kit 亨廷顿蛋白(HTT)ELISA试剂盒
促进成骨细胞分化因子抗体 MFI2 ELISA Kit 黑素转铁蛋白(MFI2)ELISA试剂盒
甘油磷酸二酯酶磷酸结构域3抗体 MREG ELISA Kit 黑素曲菌素(MREG)ELISA试剂盒
γ-谷氨酰基环转移酶抗体 MLPH ELISA Kit 黑素亲和素(MLPH)ELISA试剂盒
生长分化因子8/肌肉抑制素抗体 MC5R ELISA Kit 黑素皮质激素5受体(MC5R)ELISA试剂盒
鹅细小病毒GPV抗体 MC4R ELISA Kit 黑素皮质激素4受体(MC4R)ELISA试剂盒
胃泌素/蛙皮素抗体 MC3R ELISA Kit 黑素皮质激素3受体(MC3R)ELISA试剂盒
3-磷酸甘油醛脱氢酶 MIA1 ELISA Kit 黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)ELISA试剂盒
胶质细胞源性神经营养因子抗体 MCAM ELISA Kit 黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)ELISA试剂盒
β半乳糖苷酶抗体 AIM2 ELISA Kit 黑素瘤缺乏因子2(AIM2)ELISA试剂盒
gamma氨基丁酸B型受体1抗体 AIM1 ELISA Kit 黑素瘤缺乏因子1(AIM1)ELISA试剂盒
G蛋白/鸟苷酸结合蛋白抗体 PRAME ELISA Kit 黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)ELISA试剂盒
GDNF家族受体α4抗体 GDNFRα4 MCSP ELISA Kit 黑色素瘤关联硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)ELISA试剂盒
神经节肽抗体 ME20M ELISA Kit 黑色素瘤关联ME20(ME20M)ELISA试剂盒
谷氧还蛋白/巯基转移酶抗体 MCHR1 ELISA Kit 黑色素聚集激素受体1(MCHR1)ELISA试剂盒
G蛋白偶联受体GPR113蛋白抗体 MLANA ELISA Kit 黑色素A(MLANA)ELISA试剂盒
甘丙肽受体1抗体 HPS6 ELISA Kit 赫曼斯基普德拉克综合征蛋白6(HPS6)ELISA试剂盒
生长抑制DNA损伤基因34抗体 NFYC ELISA Kit 核转录因子Y亚基γ(NFYC)ELISA试剂盒
生长分化因子1抗体 NUMA1 ELISA Kit 核有丝分裂器蛋白1(NUMA1)ELISA试剂盒
葡萄糖激酶抗体 NFRkB ELISA Kit 核因子相关κB结合蛋白(NFRkB)ELISA试剂盒
G蛋白偶联受体78抗体 IκBβ ELISA Kit 核因子κB抑制因子β(IκBβ)ELISA试剂盒
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
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文献和实验xfnidage 我要做拟南芥的转基因，构建了一个双35S启动子的T质粒用来转化，就是两个35S启动子串联。不知道这样做会不会产生负面影响，望各位指教！ freecell 什么叫“负面影响”？ Fasta921 xfnidage wrote: 我要做拟南芥的转基因，构建了一个双35S启动子的T质粒用来转化，就是两个35S启动子串联。不知道这样做会不会产生
源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
【求助】一个关于基因改造的问题，希望各位站友帮帮忙！祝各位国庆快乐！
significantly affected compared with those in wild-type mice。 woxingwosu 没有看原文的方法，只能根据你的文字试着回答一下。 问题1： 文章是通过转基因的办法把这个RUNX2转到小鼠里面从而达到过表达这个蛋白的作用。做法可能是构建一个质粒，把Col1a1启动子（这个启动子应该是在小鼠能够有很强的启动作用）和RUNX2基因（放在col1a1启动子下游）连接在这个质粒里。构建好质粒后把它注射到小鼠
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