转基因构建35S启动子-GUS基因染料法qPCR试剂盒

转基因构建35S启动子-GUS基因染料法qPCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
α3(DEFα3)ELISA试剂盒
铁调节蛋白25抗体    DEFα1 ELISA Kit    防御素α1(DEFα1)ELISA试剂盒
HD域内含蛋白2抗体    AADAC ELISA Kit    芳乙酰胺去乙酰化酶(AADAC)ELISA试剂盒
艾滋病病毒p55抗体    ARO ELISA Kit    芳香酶(ARO)ELISA试剂盒
造血细胞激酶抗体    AANAT ELISA Kit    芳香胺-N-乙酰基转移酶(AANAT)ELISA试剂盒
HEAT重复内含蛋白5B蛋白抗体    AHRR ELISA Kit    芳烃受体抑制因子(AHRR)ELISA试剂盒
缺氧诱导基因1B蛋白抗体    AFMID ELISA Kit    芳犬尿氨酸甲酰胺酶(AFMID)ELISA试剂盒
乙酰化组蛋白H4抗体    ARSK ELISA Kit    芳基硫酸酯酶K(ARSK)ELISA试剂盒
热休克蛋白B2抗体    ARSJ ELISA Kit    芳基硫酸酯酶J(ARSJ)ELISA试剂盒
人类白细胞抗原抗体B27    ARSI ELISA Kit    芳基硫酸酯酶I(ARSI)ELISA试剂盒
螺旋环螺旋转录因子HATH6抗体    ARSH ELISA Kit    芳基硫酸酯酶H(ARSH)ELISA试剂盒
神经调节蛋白1β2抗体    ARSG ELISA Kit    芳基硫酸酯酶G(ARSG)ELISA试剂盒
转基因构建35S启动子-GUS基因染料法qPCR试剂盒HDHD3蛋白抗体    ARSF ELISA Kit    芳基硫酸酯酶F(ARSF)ELISA试剂盒
HEATR3蛋白抗体    ARSE ELISA Kit    芳基硫酸酯酶E(ARSE)ELISA试剂盒
乳腺癌增强蛋白抗体    ARSD ELISA Kit    芳基硫酸酯酶D(ARSD)ELISA试剂盒
单甲基组蛋白H3K9抗体    ARSB ELISA Kit    芳基硫酸酯酶B(ARSB)ELISA试剂盒
HDHD2B蛋白抗体    ARSA ELISA Kit    芳基硫酸酯酶A(ARSA)ELISA试剂盒
造血干细胞特异性相关结合蛋白1抗体    PANK4 ELISA Kit    泛酸激酶4(PANK4)ELISA试剂盒
I类组织相容性H-2抗原抗体D-Dalpha链抗体    PANK3 ELISA Kit    泛酸激酶3(PANK3)ELISA试剂盒
HEAT重复内含蛋白5A蛋白抗体    PANK2 ELISA Kit    泛酸激酶2(PANK2)ELISA试剂盒
热休克蛋白70抗体    PANK1 ELISA Kit    泛酸激酶1(PANK1)ELISA试剂盒
羟类固醇脱氢酶17β抗体    USP8 ELISA Kit    泛素特异性肽酶8(USP8)ELISA试剂盒
透明质酸结合蛋白4抗体    UCHL1 ELISA Kit    泛素羧基端酯酶L1(UCHL1)ELISA试剂盒
A型流感病毒H5N1凝集素抗体    UBE3A ELISA Kit    泛素连接酶E3A(UBE3A)ELISA试剂盒
A型流感病毒核衣壳蛋白抗体    UBE2L3 ELISA Kit    泛素结合酶E2C结合蛋白E2L3(UBE2L3)ELISA试剂盒
A型流感病毒核衣壳蛋白抗体    UBE2C ELISA Kit    泛素结合酶E2C(UBE2C)ELISA试剂盒
A型流感病毒核衣壳蛋白抗体    UBE2A ELISA Kit    泛素结合酶E2A(UBE2A)ELISA试剂盒
B型流感病毒蛋白抗体    UCRP ELISA Kit    泛素交叉反应蛋白(UCRP)ELISA试剂盒
人类乳头状瘤病毒16-E7抗体    UBE1L ELISA Kit    泛素激活酶样蛋白(UBE1L)ELISA试剂盒
跨膜蛋白酶丝氨酸1抗体    UBAP2 ELISA Kit    泛素关联蛋白2(UBAP2)ELISA试剂盒
肺癌癌基因蛋白3抗体    UBR4 ELISA Kit    泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4(UBR4)ELISA试剂盒
高密度脂蛋白抗体    UBD ELISA Kit    泛素D(UBD)ELISA试剂盒
蛋白激酶底物相关蛋白抗体    UBC ELISA Kit    泛素C(UBC)ELISA试剂盒
艾滋病病毒抗体    Ub ELISA Kit    泛素(Ub)ELISA试剂盒
流感病毒H3N2血凝素抗体    UBQLN4 ELISA Kit    泛醌蛋白4(UBQLN4)ELISA试剂盒
人乳头瘤病毒16型L2抗体    UBQLN3 ELISA Kit    泛醌蛋白3(UBQLN3)ELISA试剂盒
A型禽流感病毒H7N9 M1蛋白抗体    UBQLN2 ELISA Kit    泛醌蛋白2(UBQLN2)ELISA试剂盒
水蛭素抗体    UBQLN1 ELISA Kit    泛醌蛋白1(UBQLN1)ELISA试剂盒
副肿瘤综合症小脑变性相关蛋白抗体    UBN2 ELISA Kit    泛核蛋白2(UBN2)ELISA试剂盒
植物热休克蛋白93抗体    UBN1 ELISA Kit    泛核蛋白1(UBN1)ELISA试剂盒
重组人乳头瘤病毒抗体    UQCRC1 ELISA Kit    泛醇细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅰ(UQCRC1)ELISA试剂盒
长链烯脂酰辅酶A脱氢酶抗体    TGOLN2 ELISA Kit    反式高尔基体网状结构蛋白2(TGOLN2)ELISA试剂盒
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。