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- 2025年07月15日
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低温冷藏
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详见说明书
- 英文名：
详见说明书
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 规格：
50T
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号 反应物 剂量 1 逆转录buffer 2μl
2 上游引物 0.2μl
3 下游引物 0.2μl
4 dNTP 0.1μl
5 逆转录酶MMLV 0.5μl
6 DEPC水 5μl
7 RNA模版 2μl
8 总体积 10μl
减数分裂缺陷蛋白1抗体
细胞增殖诱导蛋白60
线粒体载体同源蛋白2抗体
线粒体裂变调节蛋白1抗体
线粒体蛋白18抗体
生长激素诱导跨膜蛋白抗体
线粒体裂变因子MFF抗体
小鼠血清白蛋白抗体
黑素皮质素4受体抗体
黑素皮质素受体5抗体
甲状腺激素转运蛋白/单羧酸转运蛋白7/8抗体
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MARK2抗体
磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MARK2抗体
转基因元件RuBiSCo启动子染料法qPCR试剂盒基质金属蛋白酶9抗体
磷酸化蛋白激酶MST2抗体
磷酸化蛋白激酶MST1抗体
多药耐药相关蛋白9抗体
基质金属蛋白酶-2抗体
基质金属蛋白酶2抗体
有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1抗体
有丝分裂阻滞缺陷蛋白2抗体
β2微球蛋白抗体
磷酸化神经上皮酪氨酸激酶/乳腺癌激酶10抗体
E3连接酶MMS21蛋白抗体
环指蛋白60抗体
肌球蛋白轻链7抗体
心脏肌球蛋白结合蛋白抗体
肌球蛋白重链9抗体
髓系/淋巴或混合型白血病11抗体
干扰素诱导GTP结合蛋白MX2抗体
乳腺上皮细胞抗原抗体BA46抗体
拟南介金属离子转运蛋白抗体
中脑核仁蛋白抗体
肌球蛋白重链7抗体
肌间蛋白1抗体
肌间蛋白2抗体
肌球蛋白轻链激酶3抗体
肌球蛋白轻链激酶2抗体
丝裂原活化蛋白激酶3K10抗体
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MST4抗体
肌球蛋白7a/常染色体隐性耳聋蛋白2抗体
膀胱癌突变蛋白1抗体
肌肉特定环指蛋白3抗体
肠细胞分化相关因子1抗体
环指蛋白62抗体
MHC I类链相关蛋白B
膜蛋白MLC1抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗体
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MLK3抗体
磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MLK3抗体
有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体
磷酸化有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体
磷酸化有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体
磷酸化有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体
磷酸化有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体
肌球蛋白磷酸酶抗体
磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体
磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体
磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体
磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗体
磷酸化肝细胞生长因子受体抗体
丝裂原活化蛋白激酶MKK6抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗体
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK6抗体
嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗体
甲硫氨酸脑啡肽抗体
抗体
基质金属蛋白酶9抗体
原癌基因M-ras抗体
单核细胞趋化蛋白1抗体
抗体
鸡毒支原体抗体
单克隆抗体 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
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文献和实验Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
。现在已经涉及到生命科学研究的各个领域，比如基因的差异表达分析，SNP 检测，等位基因的检测，药物开发，临床诊断，转基因研究等。 在 Real-time qPCR 技术的发展过程中，定量 PCR 仪的发展起了至关重要的作用。1995 年，美国 PE 公司（已经并入 Invitrogen 公司）成功研制了 Taqman 技术，1996 年推出了首台荧光定量 PCR 检测系统，通过检测每个循环的荧光强度，通过 Ct 值进行数据分析。从而荧光定量 PCR 获得广泛应用。现在的定量 PCR 仪有 ABI
源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
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