大麦内标准PKABA1基因探针法PCR试剂盒

大麦内标准PKABA1基因探针法PCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
核小体装配蛋白1样1(NAP1L1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Nucleosome Assembly Protein 1 Like Protein 1 (NAP1L1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
妊娠带蛋白(PZP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Pregnancy Zone Protein (PZP)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
精氨酸/丝氨酸丰富剪接因子2(SRSF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Serine/Arginine Rich Splicing Factor 2 (SRSF2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
醛脱氢酶1家族成员A1(ALDH1A1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Aldehyde Dehydrogenase 1 Family, Member A1 (ALDH1A1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
前列腺蛋白类脂肪酶B(LIPB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Lipophilin B, Prostatein Like (LIPB)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Beta-Site APP Cleaving Enzyme 1 (bACE1)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
早老素1(PSEN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Presenilin 1 (PSEN1)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
血管非炎性蛋白1(VNN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Vanin 1 (VNN1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CAMK2α)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Alpha (CAMK2a)    48T/96T    Rattus norvegicus (Rat)
拓扑异构酶Ⅱβ(TOP2β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Topoisomerase II Beta (TOP2b)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
大麦内标准PKABA1基因探针法PCR试剂盒再生胰岛衍生蛋白3γ(REG3γ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 3 Gamma (REG3g)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
异连蛋白β(DTNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Dystrobrevin Beta (DTNb)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
脊椎蛋白1(SPON1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Spondin 1 (SPON1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
互联蛋白神经元中间丝蛋白α(INα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Internexin Neuronal Intermediate Filament Protein Alpha (INa)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
Lin-28同源物A(LIN28A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Lin-28 Homolog A (LIN28A)    48T/96T    Mus musculus (Mouse)
组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 1 (TIMP1)    48T/96T    Canis 
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。