升麻鉴定PCR试剂盒

升麻鉴定PCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
血红蛋白θ1(HBθ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Hemoglobin Theta 1 (HBq1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
血红蛋白β(HBβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Hemoglobin Beta (HBb)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
磷脂爬行酶5(PLSCR5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Phospholipid Scramblase 5 (PLSCR5)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
糖蛋白M6B(GPM6B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Glycoprotein M6B (GPM6B)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
嗅素2(OLFM2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Olfactomedin 2 (OLFM2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
嗅素1(OLFM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Olfactomedin 1 (OLFM1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
突触蛋白Ⅱ(SYN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Synapsin II (SYN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
突触蛋白Ⅲ(SYN3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Synapsin III (SYN3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
尿皮质素3(UCN3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Urocortin 3 (UCN3)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
斜方蛋白1(RHOM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Rhombotin 1 (RHOM1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
核糖核酸外切酶1(ERI1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Exoribonuclease 1 (ERI1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
核糖核酸酶K(RNASEK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Ribonuclease K (RNASEK)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
5'-3'外切核糖核酸酶1(XRN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for 5'-3'Exoribonuclease 1 (XRN1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
5'-3'外切核糖核酸酶2(XRN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for 5'-3'Exoribonuclease 2 (XRN2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
核糖核酸酶A2(RNASE2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Ribonuclease A2 (RNASE2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
泛素C(UBC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Ubiquitin C (UBC)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
干扰素ε(IFNε)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interferon Epsilon (IFNe)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
干扰素κ(IFNκ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Interferon Kappa (IFNk)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
酶2(PON2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Paraoxonase 2 (PON2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
核连蛋白1(NUCB1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Nucleobindin 1 (NUCB1)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
核连蛋白2(NUCB2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Nucleobindin 2 (NUCB2)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
升麻鉴定PCR试剂盒速激肽4(TAC4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Tachykinin 4 (TAC4)    48T/96T    Homo sapiens (Human)
粘蛋白21(MUC21)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)    ELISA Kit for Mucin 21 (MUC21)轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。