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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
一年
- 英文名：
Seman platycladiPCR
- 库存：
100
- 供应商：
上海一研
- 规格：
50次
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 阳性模板上游引物F 0.5μl
3 阳性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 阳性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 总体积 50μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
基因反应体系：
序号 反应物 剂量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 内参照上游引物F 0.5μl
3 内参照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待测样品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 总体积 50μl
(IFNb) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glypican 4 (GPC4) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
干扰素调节因子3(IRF3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interferon Regulatory Factor 3 (IRF3) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
细胞外基质蛋白1(ECM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Extracellular Matrix Protein 1 (ECM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
肾上腺髓质素(ADM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Adrenomedullin (ADM) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
干扰素β(IFNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
柏子仁鉴定PCR试剂盒白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
干扰素β(IFNβ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
基质金属蛋白酶11(MMP11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 11 (MMP11) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
白介素18(IL18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 18 (IL18) 48T/96T Capra hircus; Caprine (Goat)
白介素18(IL18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 18 (IL18) 48T/96T Equus caballus; Equine (Horse)
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Rhesus monkey (Simian)
白介素18(IL18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 18 (IL18) 48T/96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃ 2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
PCR特异性：
1.primers design
这是重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些条件：
1)足够长，18～24bp，以保证特异性，当然，不是说越长越好，太长的primer同样会降低特异性，并且降低产量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中间序列要多GC，以增加稳定性；
4)避免3'端GCrich，个BASE不要有GC，或者5个有3个不要是GC。
5)避免3'端的互补，否则，容易造成DIMER；
6)避免3'端的错配；
7)避免内部形成二级结构；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值时不算，但在检测互补和二级结构要加上它们；
9)使用兼并primer时，要参考密码子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用较高的primer浓度(1μM～3μM)；
10)学会使用一种design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括绝对定量和相对定量）和定性分析。 主要服务：DNA或RNA的绝对定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
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。 2. 鼠尾直接PCR试剂盒（常温裂解）：一步法 PCR；处理鼠尾样本无需加热；用于高通量鉴定、筛选。 3. 通用植物直接PCR试剂盒：无需进行 DNA 纯化；高效特异性扩增样品；用于多种植物叶片的处理。 4.EDTA抗凝血直接PCR试剂盒：无需预处理血液；世界上血液耐受能力最强的 PCR 反应体系；安全可靠。 5.植物总RNA提取试剂盒：整套试剂盒RNase-Free；RNA得率高；质量高；安全快速。 有奖免费试用： RIPA裂解液(中) 火晶梯度PCR仪 康宁SORENSON
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多重PCR的主要用于多种病原微生物的同时检测或鉴定和病原微生物，某些遗传病及癌基因的分型鉴定。多种病原微生物的同时检测或鉴定，是在同一PCR反应管中同时加上多种病原微生物的特异性引物，进行PCR
仅仅是扩增的方法不同而已,一个是普通的PCR,一个是RTPCR. 如果需要鉴定染色体的DNA序列有无差别或基因突变,可以用PCR-SSCP,我曾做过这方面的实验,检测病人有无基因的点突变,同时扩增病人和正常人的基因片段,然后做sscp,只要有一个核苷酸的区别,变性SDS-PAGE后,条带就会有很大的区别. 而RTPCR-SSCP 检测的是cDNA片段有无区别的实验。 需要注意的是SSCP技术通常用到银染显色，silver staining 非常敏感 ，实验时对水的要求很高
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