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绿脓假单胞菌PCR试剂盒

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  • YBio/钰博生物已认证
  • 中国
  • 2025年07月13日
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    • 英文名

      Pseudomonas aeruginosa

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      上海钰博生物科技有限公司

    • 保存条件

      -20℃保存

    • 规格

      50次

    绿脓假单胞菌PCR试剂盒
    Pseudomonas aeruginosa

    产品简介:
    绿脓假单胞菌又称铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),1882 年首先由 Gersard 从伤口脓液中分离到,是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒 形的细菌,只有单向的运动性。它是一种机会性感染细菌,且对植物亦是机会 性感染的,感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色,故名。广泛分布于自然界及 正常人皮肤、肠道和呼吸道,是临床上较常见的条件致病菌之一,因此快速检 测绿脓假单胞菌具有重要意义。本产品是根据 PCR 原理开发检测绿脓假单胞菌 的试剂盒,它具有下列特点:

    1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
    2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增绿脓假单胞菌,与其他微生物没有
    交叉反应。
    3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
    4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
    5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

    产品细节图片1
    规格及成分:
    成 份 编号 十孔盒包装
    PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL(红盖)
    超纯水 100935 1 mL(亮黄色)
    绿脓假单胞菌PCR 引物混合液 13-20210yw 100 μL(白盖)
    绿脓假单胞菌PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) 60908-20210pc 50 μL(黄盖)
    使用手册 13-20210sc 1份

    运输及保存:
    低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
    自备试剂:
    样本DNA。
    使用方法:
    一、样品 DNA 的制备

    1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
    2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是绿脓假单胞菌 PCR 阳性对照 的 1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到 模板 DNA 放冰上待用。
    二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
    3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:

    成分
    样品管
    N+2 个
    PCR
    阴性对照
    PCR
    阳性对照
    PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
    绿脓假单胞菌PCR 引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
    N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL - -
    PCR 阴性对照( - 18 μL -
    PCR 阳性对照(绿脓假单胞菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液)
    -

    -

    18 μL

    4. 按下表设置 PCR 反应:
    过程 温度 时间
    预变性 95℃ 5 min

    PCR 反应
    (35 个循环)
    95℃ 15 sec
    57℃ 15 sec
    72℃ 40 sec
    最后延伸 72℃ 10 min
    产品细节图片2
    三、电泳检测
    5.
    取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物 阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。
     

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    相关实验
    • 绿脓假单胞菌 Pesudomonas pyocyaneum

      一种细菌。因其寄生在伤口产生色素(绿脓菌素)而使脓汁呈暗绿色。1882年 Gessard从绿色脓汁中分离出这种细菌。它是很常见的一种细菌,另外由于对抗菌素有较强的抗性,最近已成了医院内感染的重要细菌,还因为寄主抵抗力减弱而遭到致命后果而成为重要的问题。这类病原菌称为机会致病菌或条件致病菌( oppotunistic pathogen, conditionedpathogen)。  

    • 绿脓菌素 pyocyanin

          由绿脓假单胞菌培养物中产生的绿色色素。培养基因为有此色素而呈绿色。它可发生可逆的氧化还原作用,氧化型呈蓝色(碱性时)和红色(酸性时),变色点的 pK= 5.0;还原型无色,但在酸性条件下出现氧化还原的中间阶段(绿色)。氧化还原电位 Eo ′ =-0.034V( pH=7)。  

    • 标准菌株验证鉴定步骤

      IMVC 生化试验:     2.3 铜绿假单胞菌:  革兰氏染色试验:革兰氏阴性杆菌,红色A。 氧化酶试验:将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿,用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落,涂在试纸上。在60s 内变为蓝色或蓝紫色为阳性,不变色为阴性。 绿脓菌素试验:取斜面培养物接种于PDP 琼脂培养基斜面上,培养24 小时,加三氯甲烷3~5 ml 至培养管中,搅碎培养基并充分振摇。静置片刻,将三氯甲烷相移至另一试管中,加入1mol/L 盐酸试液约1 ml,振摇后,静置片刻,观察。若盐酸溶液呈粉红

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