牛肾盂肾炎棒杆菌PCR试剂盒

产品简介：
肾棒状杆菌(Corynebacterium renale)革兰氏染色阳性，为球杆状或棍棒 状，呈单在、成丛或栅栏样排列。细菌性肾盂肾炎由肾棒状杆菌引起，主要发 生于母牛，公牛少见，马和绵羊偶可发生。本病为尿源性感染，因此病原菌经 尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎或子宫内膜炎，然后再逆行导致 肾盂肾炎。由于肾组织损伤与尿液滞留，最终病畜可因尿毒症而死亡。病牛主 要表现发热，食欲不振，尿频，尿少，尿因混有黏液、脓液、大量蛋白质、脓 细胞和白细胞、脱落的上皮细胞等而浑浊带血色。尿液涂片或细菌培养可发现 病原菌。严重病例常发生尿毒症。因此牛肾盂肾炎棒杆菌检测具有重要的意义。 本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛肾盂肾炎棒杆菌。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR 引物混合液	13-15850yw	100 μL（白盖）
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-15850pc	100 μL（黄盖）
天净沙 DNA 释放剂（试用装）	130982	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-15850sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样， 以此作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 50 次免 DNA 提取的天净沙 DNA 释放剂，本产品的裂解液 可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
牛肾盂肾炎棒杆菌PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
样品制备阴性对照	-	18 μL	-
样品制备阴性对照	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照 必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增 产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。