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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Eperythrozoon felix
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR试剂盒
Eperythrozoon felix
产品简介:Eperythrozoon felix
本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增猫附红细胞体(猫嗜血支原体)序列,与其他没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验相关实验
的附红细胞体也可能,比如有论文发现犬血中可以检测出猫的附红细胞体(相对准确的名字叫猫血巴通体Haemobartonella felis)的16SrRNA基因序列。 再说一下loveyingzi所谈到的问题。我们知道,血液中常常感染一些细菌,如大肠杆菌或葡萄球菌等,既然你是用的16SrRNA通用的引物,那难免会同时扩增细菌的16SrRNA基因。在普通的琼脂糖电泳中,你扩增的1500bp的条带可能是细菌或附红细胞体16SrRNA基因序列的混合物。我相信你没有污染,但是你连接转化后应通过酶切等鉴定方法,选出
目标。因此,无论是由恒定区基因决定的防御机制,还是由许多可变区基因决定的结合抗原的特异性,Ig的基因家族都成功地保持了恒定。其中,可变区基因在进化期间已增加了很多,同时通过基因复制和体细胞突变,也扩充了许多。3.4 同类抗体(异构型),Ig分子的恒定区中含有共同的肽结构。虽然这些抗体可以与不同的抗原起反应,但在免疫测定中,可以用同一抗体试剂检测他们。例如,与两种不同变应原(如豚草属花粉和猫的毛皮垢屑)起反应的IgE抗体,它们两者都可以用抗-IgE抗体来检测。其中,该抗-IgE抗体能与所有IgE分
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猫附红细胞体(猫嗜血支原体)PCR试剂盒
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