MLO-Y4细胞 小鼠骨样细胞系

MLO-Y4细胞 小鼠骨样细胞系，MLO-Y4细胞 小鼠骨样细胞系，MLO-Y4细胞 小鼠骨样细胞系 货号：YT800887 英文名称：MLO-Y4 小鼠骨样细胞，品牌：伊塔生物，规格：T25，形态特性：成纤维细胞样，生长特性：贴壁生长　，特征特性：A-5，培养条件：aMEM+10%FBS，传代方法：1:3传代；2~3天1次。，冻存条件:无血清细胞冻存液,STR:已通过STR鉴定

 

细菌裂解液说明书

规格：100ml

保存：2-8℃，1年

产品说明：

   细菌裂解缓冲液，由NaH2PO4、NaCl、Tween-20等成分组成，裂解后分离纯化的蛋白可用于SDS-PAGE电泳。

使用说明（仅供参考）：

1、将所收集的菌体重悬于5mL细菌裂解缓冲液中。

2、加入50 μL 100 mgImL溶菌酶，冰上放置30 min，超声波破碎5 mi。

3、超声完毕后，依次加入0.5 μL 5 U/mL DNasel，5 μL 10 μg/mL RNaseA， 125μL  

1mol/LMgCl₂，250 μL 20% TrionX-100，4℃放置30min。

4、14000×g 离心10min，分别取部分上清、沉淀以备后续试验。

5、将剩余上清，过Ni-NTA His·Bind层析柱（或具体实验要求层析柱及相关试

剂），5 mL洗涤缓冲液（含50mM NaH₂PO4∶2 H₂O，0.3M NaCl，0.05% Tween-20，10mM咪唑，pH8.0）

6、洗His层析柱后，加5 mL洗脱缓冲液（含50 mM NaH₂PO4∶2 H₂O，0.3 M  

NaCl，0.05% Tween-20，250 mM咪唑，pH7.0），收集目的蛋白。

7、将收集的上清、沉淀、纯化后蛋白，10% SDS-PAGE电泳鉴定。

注意事项：

1、我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。

2、本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

 

联系人	刘欣

常温细胞收货当天处理方式
1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。
2.镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象， 方便后续售后处理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身，置于培养箱中静置培养 2~4h 后进行传代操作。
4.观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实际情况决定)，首次传代推荐比例 1：2 到 1：3（按实际收货细胞密度决定，若不确定 可联系技术支持）；若细胞密度不到 80%则可取出部分培养基留 6ml 左右原瓶培养 基继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。
5.由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代（参考附件），或及时联系技术支持进行指导传代。
6.若观察到异常或者对细胞有疑问，请及时跟代理商或者我们联系；对于细胞培养操 作及培养注意事项有疑问的，可跟我们的技术支持交流。附:收到贴壁细胞漂浮处理方法（部分细胞由于贴壁松散，会出现运输后漂浮，冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮，属于不可避免因素，正确处理后都可以正常生长）
1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞（1200rpm 3min）去除旧培养基；
2、用 PBS 重悬细胞，将所有细胞收集到一个离心管中，再次离心（1200rpm3min）去 除 PBS；
3、加入 1ml 左右 0.25%胰酶重悬细胞，混匀即可，不能吹打太多次，放入培养箱消化 细胞，根据细胞特性决定消化时间（TM3、TM4、293 系列约 1~2 分钟）；
4、消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培 养基混匀以终止消化，离心（1200rpm 3min）去除胰酶；
5、加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀，按比例接入无菌培养瓶/皿中；
6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞，若有 3-5 个成团的小细胞团可不用 重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。
贴壁细胞传代
1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；
2. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞（每10cm 2培养表面积约2mL溶液）；从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次（注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；
3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的解离剂；试剂量应足以覆盖细胞层(每10cm 2大约0.5mL)；
4. 轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层；吸出多余解离试剂，T25 细胞培养瓶留 200ul 左右即可；
5. 将培养容器在室温下孵育约 2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异）；
6. 在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每 30 秒钟检查一次解离情况；也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离；
7. 细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽；加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基；吹打细胞层表面数次，使培养基分散；
8. 将细胞转移到15mL 无菌离心管中，以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟（请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；
9. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱（注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖）。
悬浮细胞传代
方法一：
1. 当细胞适合传代（即：处于对数生长期而未达到汇合状态）时，从培养箱中取出培养瓶，使用无菌吸管从培养瓶中取出少量细胞样品；如果吸取样品前细胞已经沉淀，应转动培养瓶，使细胞在培养基中均匀分布；
2. 通过此样品，采用血球计数器或细胞计数仪测定总细胞数；计算将细胞稀释到推荐接种密度时需要加入的培养基体积；
3. 在无菌状态下将适量预热的生长培养基加入到培养瓶中；必要时可将培养的细胞分到多个培养瓶中；
4. 将培养瓶的瓶盖拧松一圈，以便进行充分的气体交换（或者使用透气性瓶盖），并将培养瓶恒温培养箱中静置培养（注：为了尽量减少细胞碎片和无用的代谢副产物在培养体系中蓄积，每周应将细胞悬液至少离心一次，离心力为200×g，时间为3-5分钟，然后用新鲜的生长培养基重新 悬浮细胞沉淀）。
方法二：
1. 将细胞悬液转移到 15mL无菌离心管中，以 200×g 离心力离心 3-5 分钟请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；
2. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中；
3. 将培养瓶的瓶盖拧松一圈，以便进行充分的气体交换（或者使用透气性瓶盖），并将培养瓶恒温培养箱中静置培养。
细胞冻存
1. 配制冻存培养基，于 2℃-8℃下储存，直至使用；注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系；
2. 冻存贴壁细胞时，利用传代（详细步骤参考细胞传代）时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来；用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞；根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量；
3. 以约200×g的 离心力将细胞悬液离心3-5 分钟；在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀；
4. 用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度；
5. 将细胞悬液分装到若干冻存管中；分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态；
6. 使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1℃；或将装有细胞的冻存管放入Nalgene细胞冻存盒中，然后将冻存盒置于–80℃条件下过夜；
7. 将已经冷冻的细胞转移到液氮罐中储存。
8. 没有上述条件的实验室，亦可按下列顺序依次降温：室温→4℃30min→-20℃ 30-60min→-80℃过夜→液氮保存。
细胞复苏
1. 将装有冻存细胞的冻存管从液氮罐中取出，立即放入 37℃水浴中；
2. 在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，使细胞迅速解冻（1 分钟内）；
3.将冻存管转移到超净工作台内；打开盖子前，用 75%酒精擦拭冻存管外部；
4. 将解冻的细胞逐滴转移到装有适量经过预热、适合该细胞系的完全生长培养基的离心管内；
5. 以大约200×g的 离心力将细胞悬液离心 3-5分钟；实际离心速度和时间取决于细胞种类；
6. 离心后，检查上清液是否清澈，有无完整的细胞沉淀；在无菌条件下，小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀；
7. 轻轻将细胞重新悬浮在完全生长培养基中，然后转移到合适的培养容器和推荐的培养环境中（注：培养瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数量，培养环境取决于细胞和培养基类型）。
细胞培养常见问题及解决方法问题原因
解决方案


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