人横纹肌肉瘤细胞系；A-204细胞/STR鉴定

人横纹肌肉瘤细胞系；A-204细胞，人横纹肌肉瘤细胞系；A-204细胞，人横纹肌肉瘤细胞系；A-204细胞 货号：YT800188 英文名称：A-204，品牌：伊塔生物，规格：T25，形态特性：人胚肺成纤维细胞；IMR-90，生长特性：贴壁生长，特征特性：A-5，培养条件：McCoy＇s5AMedia+10%FBS，传代方法：1:6~1:10传代；每周2~3次，冻存条件:无血清细胞冻存液,STR:已通过STR鉴定

背景描述:	人侵性随原白血病细胞[带STR鉴定报告]该细胞是由Lozzio从一名53岁的慢性随细胞性自血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。该细胞曾被认为来源于粒系，处于高度未分化阶段; Anderson等人作了细胞膜特性的研究后，认为该细胞是红白血病细胞系。该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标，故而被广泛应用于这方面的研究。K562的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。该细胞表达CD7 (2596)
货号:	YT800208
培养基	IMDM+10%FBS+双抗
生长状态:	悬浮生长
发货方式:	复苏发货:复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。(气温较好建议用复苏发货方式);冻存发货: 细胞冻存发货需增加干冰运费，冻存发货发两管细胞每管细胞数量: 2x10“6 cells，货期1-3天(当气温低于0-C须陈存发货)。
细胞操作说明:
细胞常见问题:
检测:	细胞存种的活性检测;细菌、真菌、垂菌污第物检测，衣原体、支原体检测(黄光法、培养法等)
售后:	人慢性原白血病细胞如实验过程中发现细胞有存在有质量相关问题的现象可以提供实验数据，经确认后承诺100%全额退款。细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，可完全提供免费重新发货，实验过程中操作导致细胞问题，仅需支付物流和耗材费用，可重新发货，其他根据情况灵活处理;产品使用过程中。

常温细胞收货当天处理方式
1.收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。
2.镜下观察有无微生物污染现象，拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象， 方便后续售后处理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身，置于培养箱中静置培养 2~4h 后进行传代操作。
4.观察细胞密度若超过 80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代，请根据实际情况决定)，首次传代推荐比例 1：2 到 1：3（按实际收货细胞密度决定，若不确定 可联系技术支持）；若细胞密度不到 80%则可取出部分培养基留 6ml 左右原瓶培养 基继续培养，注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖；悬浮细胞注意离心所有培养基以收集细胞。
5.由于气温，运输等影响造成贴壁细胞漂浮的，请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代（参考附件），或及时联系技术支持进行指导传代。
6.若观察到异常或者对细胞有疑问，请及时跟代理商或者我们联系；对于细胞培养操 作及培养注意事项有疑问的，可跟我们的技术支持交流。附:收到贴壁细胞漂浮处理方法（部分细胞由于贴壁松散，会出现运输后漂浮，冬天气温低时也会出现细胞收缩漂浮，属于不可避免因素，正确处理后都可以正常生长）
1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞（1200rpm 3min）去除旧培养基；
2、用 PBS 重悬细胞，将所有细胞收集到一个离心管中，再次离心（1200rpm3min）去 除 PBS；
3、加入 1ml 左右 0.25%胰酶重悬细胞，混匀即可，不能吹打太多次，放入培养箱消化 细胞，根据细胞特性决定消化时间（TM3、TM4、293 系列约 1~2 分钟）；
4、消化好后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培 养基混匀以终止消化，离心（1200rpm 3min）去除胰酶；
5、加入 5ml 左右的细胞相应的完全培养基混匀，按比例接入无菌培养瓶/皿中；
6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞，若有 3-5 个成团的小细胞团可不用 重新消化，使之贴壁后待细胞生长稳定后再消散细胞。
贴壁细胞传代
1. 从培养容器中吸出用过的细胞培养基并丢弃；
2. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞（每10cm 2培养表面积约2mL溶液）；从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液，以避免搅动细胞层，前后摇晃容器数次（注：冲洗步骤可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；
3. 从培养容器中吸出冲洗液并丢弃，向培养瓶中加入预热的解离剂；试剂量应足以覆盖细胞层(每10cm 2大约0.5mL)；
4. 轻轻摇晃容器，使试剂完全覆盖细胞层；吸出多余解离试剂，T25 细胞培养瓶留 200ul 左右即可；
5. 将培养容器在室温下孵育约 2分钟（请注意实际孵育时间根据所用细胞系不同而有所差异）；
6. 在显微镜下观察细胞解离情况；如果解离程度未达 90%，可将孵育时间延长几分钟，每 30 秒钟检查一次解离情况；也可轻轻拍打培养容器以加快细胞解离；
7. 细胞解离程度大于等于 90%时，倾斜培养容器，使细胞上液体尽快流尽；加入所用解离剂两倍体积的预热完全生长培养基；吹打细胞层表面数次，使培养基分散；
8. 将细胞转移到15mL 无菌离心管中，以 200×g 的离心力离心 3-5 分钟（请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；
9. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中，把细胞放回培养箱（注：如果使用培养瓶，将其放入培养箱前应将瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换，除非您使用的是通气式培养瓶和透气性瓶盖）。
悬浮细胞传代
方法一：
1. 当细胞适合传代（即：处于对数生长期而未达到汇合状态）时，从培养箱中取出培养瓶，使用无菌吸管从培养瓶中取出少量细胞样品；如果吸取样品前细胞已经沉淀，应转动培养瓶，使细胞在培养基中均匀分布；
2. 通过此样品，采用血球计数器或细胞计数仪测定总细胞数；计算将细胞稀释到推荐接种密度时需要加入的培养基体积；
3. 在无菌状态下将适量预热的生长培养基加入到培养瓶中；必要时可将培养的细胞分到多个培养瓶中；
4. 将培养瓶的瓶盖拧松一圈，以便进行充分的气体交换（或者使用透气性瓶盖），并将培养瓶恒温培养箱中静置培养（注：为了尽量减少细胞碎片和无用的代谢副产物在培养体系中蓄积，每周应将细胞悬液至少离心一次，离心力为200×g，时间为3-5分钟，然后用新鲜的生长培养基重新 悬浮细胞沉淀）。
方法二：
1. 将细胞悬液转移到 15mL无菌离心管中，以 200×g 离心力离心 3-5 分钟请注意离心速度和时间依细胞种类不同而有所差异）；
2. 用最少体积的预热完全生长培养基重新悬浮细胞沉淀，将细胞悬液按照推荐比例稀释，并将适量体积的细胞悬液转移到新的细胞培养容器中；
3. 将培养瓶的瓶盖拧松一圈，以便进行充分的气体交换（或者使用透气性瓶盖），并将培养瓶恒温培养箱中静置培养。
细胞冻存
1. 配制冻存培养基，于 2℃-8℃下储存，直至使用；注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系；
2. 冻存贴壁细胞时，利用传代（详细步骤参考细胞传代）时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来；用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞；根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量；
3. 以约200×g的 离心力将细胞悬液离心3-5 分钟；在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀；
4. 用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度；
5. 将细胞悬液分装到若干冻存管中；分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态；
6. 使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1℃；或将装有细胞的冻存管放入Nalgene细胞冻存盒中，然后将冻存盒置于–80℃条件下过夜；
7. 将已经冷冻的细胞转移到液氮罐中储存。
8. 没有上述条件的实验室，亦可按下列顺序依次降温：室温→4℃30min→-20℃ 30-60min→-80℃过夜→液氮保存。
细胞复苏
1. 将装有冻存细胞的冻存管从液氮罐中取出，立即放入 37℃水浴中；
2. 在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，使细胞迅速解冻（1 分钟内）；
3.将冻存管转移到超净工作台内；打开盖子前，用 75%酒精擦拭冻存管外部；
4. 将解冻的细胞逐滴转移到装有适量经过预热、适合该细胞系的完全生长培养基的离心管内；
5. 以大约200×g的 离心力将细胞悬液离心 3-5分钟；实际离心速度和时间取决于细胞种类；
6. 离心后，检查上清液是否清澈，有无完整的细胞沉淀；在无菌条件下，小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀；
7. 轻轻将细胞重新悬浮在完全生长培养基中，然后转移到合适的培养容器和推荐的培养环境中（注：培养瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数量，培养环境取决于细胞和培养基类型）。