人白细胞弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒

一、产品概述

二、试剂盒组成（96 孔）

三、储存条件与有效期

• 储存：试剂盒所有组分2-8℃避光保存，避免反复冻融；标准品复溶后 - 20℃分装保存，1 周内用完。
• 有效期：未开封 6 个月；开封后 1 个月（2-8℃）。

四、样本要求

1. 样本类型：血清、血浆（EDTA / 肝素抗凝）、细胞培养上清、支气管肺泡灌洗液等。
2. 采集与保存：
   • 血清 / 血浆：采血后 3000rpm 离心 10min，取上清，-20℃保存，避免反复冻融。
   • 细胞上清：离心去除细胞碎片，-20℃保存。
    
3. 稀释建议：血清 / 血浆样本推荐100 倍稀释（用样本稀释液），预实验确定最佳稀释度。
4. 避免干扰：样本避免溶血、脂血，不含蛋白酶抑制剂。

五、实验步骤（室温：20-25℃）

（一）试剂准备

1. 洗涤液：20× 浓缩洗涤液按 1:19 加蒸馏水稀释，备用。
2. 标准品复溶：每管标准品加 0.3mL 样本稀释液，静置 15min，轻柔混匀，得到浓度梯度：0、0.78、1.56、3.12、6.25、12.5ng/mL。
3. 底物工作液：临用前按 1:1 混合底物 A、B 液，避光放置，30min 内用完。

（二）操作流程

1. 加样：设空白孔（加 100μL 样本稀释液）、标准孔（各加 100μL 梯度标准品）、样本孔（加 100μL 稀释后样本）；每孔设复孔，加样后轻晃微孔板混匀，37℃孵育 60min。
2. 洗板：弃孔内液体，每孔加 300μL 1× 洗涤液，静置 1min，甩干，重复3 次，拍干微孔板。
3. 加酶标抗体：每孔加 100μL 检测抗体 - HRP，封板膜密封，37℃孵育 60min。
4. 洗板：重复步骤 2，洗板5 次，拍干。
5. 显色：每孔加 90μL 底物工作液，避光，37℃孵育 10-20min（标准品前 3 孔显蓝色即可）。
6. 终止：每孔加 50μL 终止液，轻晃混匀，蓝色立即变黄。
7. 读数：15min 内用酶标仪测450nm处各孔 OD 值，以空白孔调零。

六、结果计算

1. 标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标（X），对应 OD 值（复孔均值）为纵坐标（Y），用四参数 Logistic 拟合生成标准曲线，得到回归方程（Y=aX²+bX+c）。

    

    

    

    
    
2. 样本浓度计算：将样本 OD 值代入回归方程，计算样本浓度，再乘以稀释倍数，得到原始样本 HLE 浓度。
    
3. 检测范围：0.78-12.5ng/mL；灵敏度：0.16ng/mL。
    
4. 精密度：
    
   • 批内 CV：＜8%（同批次重复检测）。
   • 批间 CV：＜10%（不同批次检测）。

七、注意事项

1. 安全防护：试剂含潜在有害物质，操作戴手套、口罩；终止液为强酸，避免接触皮肤黏膜，不慎接触立即大量清水冲洗。
2. 操作规范：
   • 严格按步骤操作，孵育时间、温度精准，避免强光直射。
   • 洗板彻底，残留洗涤液会导致背景偏高、结果偏差。
   • 底物工作液现配现用，避光保存，过期禁用。
    
3. 质量控制：每实验设空白、阴性、阳性对照，标准曲线 R²≥0.99，实验结果有效。
4. 干扰因素：样本中高浓度血红蛋白、甘油三酯会干扰结果，需预处理；避免使用含叠 氮钠试剂，会抑制 HRP 活性。
5. 其他：试剂盒组分不可混用不同批次；过期试剂严禁使用。