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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Acinetobacter baumannii
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50次
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii),又称鲍氏不动杆菌,属于 革兰氏阴性菌,是一种严格需氧、非乳糖发酵的条件致病菌,不具鞭毛,移动 性不高,但生命力极强,可广泛地存在于大自然中。该菌是不动杆菌属细菌中 在医院感染中常见的一种,也是水产养殖业动物的病原菌。它通常会引起菌血 症,肺炎,脑膜炎,腹膜炎,心内膜炎,以及泌尿道和皮肤感染。鲍曼不动杆 菌已经成为医院感染的主要来源,尤其是重症监护室。该病菌因为抗生素的滥 用,导致鲍曼不动杆菌产生抗药性,变成“多重抗药性鲍曼不动杆菌”。因此 快速灵敏检测鲍氏不动杆菌具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理 开发的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍氏不动杆菌,与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分:
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 鲍氏不动杆菌 PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 鲍氏不动杆菌 PCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) | 试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样本DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是川贝母 PCR 阳性对照的1000 倍稀释液,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 鲍氏不动杆菌 PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照(水) | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照(鲍氏不动杆菌 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) |
- |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。 对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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文献和实验作者:雷金娥, 袁莉, 李和平, 马列婷, 王亚文, 曾晓艳 作者单位:西安交通大学医学院第一附属医院检验科,陕西西安 710061 【摘要】 目的 了解我院鲍曼不动杆菌的耐药性及其产金属β-内酰胺酶(MBLs)的情况。方法 采用K-B纸片扩散法测定13种抗菌药物的耐药性;分别用金属螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)和2-巯基丙酸抑制试验测定鲍曼不动杆菌产金属β-内酰胺酶的情况。结果 91株鲍曼不动杆菌中有23株对亚胺培南耐药,其仅对阿米卡星和米诺环素耐药率较低
,通常在纯培养,在实验室,这可能是无法实现的许多细菌物种。这种多相方法还依赖于DNA-DNA杂交等技术,这些技术费时费力,特别是与现代基因组测序的简易性相比。在高通量测序的最新进展的推动下,我们与其他研究人员一起,已经开始探索基因组序列数据对于细菌物种描述和分类的适用性。在我们最近的BMC微生物学出版物中,我们利用不动杆菌属探索基因组序列的比较分析是否可以与经典的DNA-DNA杂交和表型方法相媲美。迄今为止,共有27种不动杆菌被描述,包括新出现的病原体鲍曼不动杆菌。然而,鲍曼不动杆菌与其他三种不动杆菌
环素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。 多重耐药性(multiple resistance, MDR) 系指同时对多种常用抗微生物药物发生的耐药性, 主要机制是外排膜泵基因突变, 其次是外膜渗透性的改变和产生超广谱酶。最多见的是革兰阳性菌的MDR-TB和MDR-MRSA, 以及常在ICU中出现的鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,仅对青霉烯类敏感; 嗜麦芽窄食单胞菌几乎对复方新诺明以外的全部抗菌药耐药。MDR的出现决定了联合用药的必然; MDR菌株的高频率出现, 意味着抗微生物药物时代即将结束
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