人1,25-二羟基维生素D3(DHVD3)ELISA试剂盒

产品描述：

 

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人组织因子的含量。

产品名称	人1,25-二羟基维生素D3(DHVD3)ELISA试剂盒
英文名称	Human 1,25-Dihydroxyvitamin D3(DHVD3)ELISA Kit
货号	YPH103677

人1,25-二羟基维生素D3(DHVD3)ELISA试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中丝虫抗体IGg水平。用纯化的丝虫抗体IGg抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入（NO），再与 HRP 标记的（NO）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的（NO）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中丝虫抗体IGg浓度。

试剂盒组成:

1	20 倍浓缩洗涤液	30ml×1 瓶	7	终止液	6ml×1 瓶
2	酶标试剂	6ml×1 瓶	8	标准品（270ng/L）	0.5ml×1 瓶
3	酶标包被板	12 孔×8 条	9	标准品稀释液	1.5ml×1 瓶
4	样品稀释液	6ml×1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 个

样本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2400 ng/L	5 号标准品	150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
1200ng/L	4 号标准品	150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
600ng/L	3 号标准品	150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
300ng/L	2 号标准品	150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
150ng/L	1 号标准品	150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

人1,25-二羟基维生素D3(DHVD3)ELISA试剂盒注意事项:
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
大于标准品孔的第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，
计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

人1,25-二羟基维生素D3(DHVD3)ELISA试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标
准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二
孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，
浓度分别为 180ng/L，120ng/L ，60ng/L，30ng/L， 15ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样
品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 25 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 25 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。