线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)试剂盒

线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)试剂盒详细如下：

QYS-300107	线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)试剂盒	微量法100管/96样
QYS-300108	线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)试剂盒	紫外分光光度法50管/48样

测定意义：
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA
循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果
酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生
理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧
代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的
MDH，细菌中通常只含有 NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体
中。
测定原理：
MDHm 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。 需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和
蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：100mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：20mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：1.5mL×1 支，-20℃保存；
试剂四、液体 20 mL×1 瓶，在 4℃保存；
试剂五、粉剂×1 瓶，-20℃保存；
样本测定的准备：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器
或研钵匀浆。
2、 将匀浆液于 600g，4℃离心 5min。 3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。 4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 MDH（此步可选做）。 5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或
200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），用于 MDHm 活性测定。
测定步骤： 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、检测工作液的配制：用时在试剂五中加入 19mL 试剂四和 0.5mL 蒸馏水，充分混匀待用；
用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 3、测定前将检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。 4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本和 195μL 工作液，混匀后立即记录 340nm
处 20s 时的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
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规格：50T/100T
检测方法：比色法（常量/微量）
应用领域：用于科学研究、教学、分析检测中。
用途：生化研究，科研实验
现货供应，发货速度快，江浙沪1-2天到货，其他地区3-4天。
产品优点
1、快速简便：全程约2小时，可测24/48/96例以上样本。
2、稳定性好：试剂盒2 ~ 8℃存放3个月有效。
3、再现性好：变异系数。
4、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
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