总蛋白提取细胞裂解缓冲液，R0278-500ML

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

，直到全部溶解，用 HCl 调节 PH 值到 7.4； 2.加 10 ml 10% 的 NP-40； 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠，搅拌，直到溶液澄清； 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA，用量筒定容到 100 ml，2～8 ℃ 保存； 5.理论上，蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入（抑蛋白酶肽，亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl；PMSF，Na3VO4，NaF 各 500 μl），但是 PMSF 在水溶液中很不稳定，30 分钟就会降解一半，所以 PMSF 应该

免疫共沉淀实验指南

将其稀释至 1 mg/mL 以降低缓冲体系中去污剂的浓度（但对于那些在细胞中表达水平较低的蛋白而言，10 mg/mL 这样更高的浓度可能对免疫沉淀更有效一些）。 加入推荐体积的免疫沉淀抗体至 500 µL 细胞裂解液中与目标蛋白反应。（抗体的最适用量要根据每一细胞模型中免疫沉淀靶蛋白的数量来确定）。 将细胞裂解液与抗体轻轻混匀后孵育 2h，或 4℃ 缓慢振荡过夜。（选择孵育 2h 常用于免疫沉淀与激酶或磷酸酯酶作用的活化酶。）加入100 µL Agarose protein A+G 轻轻振荡 1h

小鼠脾脏单细胞悬液制备流程及注意事项

。 加入2 mL 1×红细胞裂解液重悬细胞，室温裂解2~3 min后，立马加入10 mL PBS，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬脾脏细胞，将细胞悬液用200目筛网再次过滤后计数, 并调整细胞浓度至1×107/mL。 b) 吹打法 小鼠颈椎脱臼处死，置于75%乙醇浸泡5 min后，取出小鼠，置于无菌操作台上，左腹侧朝上。 小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏。 脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露出脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面