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RT
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见标签
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999
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鹿森生物
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1支
一般描述
JumpStart™ Taq DNA聚合酶是Sigmas高性能Taq DNA聚合酶和JumpStart Taq抗体的混合物。Taq DNA聚合酶活性通过将该酶与JumpStart Taq抗体(Taq DNA聚合酶的中和性单克隆抗体)结合而失活。抗体失活为热启动PCR提供了一种简单、有效的方法。PCR过程中,JumpStart Taq DNA聚合酶在低温(室温)下不活跃,当温度在第一步循环变性中升高到70℃以上,复合体解离,聚合酶完全激活。
应用
JumpStart™ Taq DNA聚合酶已用于:
扩增不同大小的DNA库[1]
在甲基化特异性、定量实时聚合酶链反应(MS-qPCR)中,确定BRCA1启动子甲基化状态[2]
通过PCR扩增全长HIF1β,生成质粒[3]
用于需要降低非特异性扩增的PCR扩增
用于多重PCR
用于降低引物二聚体
特点和优势
降低非特异性扩增
提高PCR特异性及产量
减少与手动或蜡热启动方法相关的设置时间担忧
低于1分钟的激活时间
包装
JumpStart Taq DNA聚合酶是以10x反应缓冲液形式提供的,并可选择是否含有MgCl2。 不含镁的10x缓冲液还包含单独一管的25 mM MgCl2用于优化。
本品为含15 mM MgCl2的10×反应缓冲液
其他说明
Sigma的JumpStart Taq DNA聚合酶是一种抗体失活的热启动酶,设计用于最大限度降低非特异性扩增并同时提高靶标的产量。 一旦反应温度达到 70°C,Taq DNA聚合酶活性就会得到恢复,使得PCR具有更高的特异性和产量。这种抗体-酶复合物可实现简单便捷的设置,并相对于手动热启动技术具有更低的污染风险。 该酶还可以被加入到预混液制备中,从而实现反应之间更高的一致性。
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文献和实验This is a protocol from Engelke et.al.(1990)which was modified by Dr.Baron.The enzyme has been used for RT-PCR,genotyping and cloning.Solutions1000X IPTG0.5M IPTG 1.19g IPTGup to 10 ml wih sterile Qfilter and store at -20℃Buffer A50 mM Tris 7.9 25
Cloning of Taq polymerase-amplified PCR products
by the 5´ hydroxyl of the original cleaved strand, reversing the reaction and releasing topoisomerase (Shuman, 1994). 实验步骤 1. Producing PCR Products for TOPO® TA Cloning 1) Set up the following 50-µl PCR reaction using Taq
为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上) 或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成, 但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可 保持50%的活性,实验表明.PCR反应时变性温度为95℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应
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