- ￥2224
- Epigentek
- P-1028-100
- 美国
- 2025年09月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海西宝
- 英文名：
Methylamp MS-qPCR Fast Kit (100 reactions)
- 规格：
100次反应
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文献和实验值偏大呢？首先需要计算引物的扩增效率。 可将基因的扩增产物进行梯度稀释（至少三个梯度，且梯度之间的 △CT 均一，防止因为操作原因导致标准曲线线性关系差，进而影响扩增效率的计算），同时进行 qPCR。将得到的标准曲线进行引物扩增效率的计算： 以 Vazyme #Q711 的荧光定量 Mix 扩增某基因为例： ① qPCR 扩增： 将 qPCR 产物进行原液、1 / 10、1 / 100 梯度稀释，每个梯度设置三个复孔，进行 qPCR 扩增，复孔间 CT 值取平均值，得到三组 CT 值。 ②
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
方程： 从线性方程上看，斜率（slope）为 -1/lg(1+E)，所以 E = 10-1/slope-1。如果从标准曲线上得到斜率（-3.3），就可以算出扩增效率（0.99）。一般来讲PCR扩增效率在 90%-110% 都是可以用于数据分析的。效率低于 100%，是由于 PCR 反应中存在抑制因素；而高于 100% 可能一些污染、非特异性扩增或者是引物二聚体造成。 3. Real-time qPCR 的种类 根据 real-time qPCR 的化学发光原理可以分为2大类：一类为探针类，包括
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