鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)LAMP试剂盒

鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)LAMP试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500nm，最大发射光谱在 530nm。
M619细胞，人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞    M619 cells, the invasive cells of choroidal melanoma
M14细胞，人黑色素瘤细胞    M14 cells, human melanoma cells
UM细胞，人葡萄膜黑色素细胞    UM cells, human uveal melanoma cells
D407细胞，人视网膜色素上皮细胞    D407 cells, human retinal pigment epithelial cells
Rb细胞，人视网膜母细胞瘤    Rb cells, a human retinoblastoma
OCM-1细胞，人眼脉络黑色素瘤细胞    OCM-1 cells, human choroidal melanoma cells
MuM－2C细胞， 人眼脉络黑色素瘤细胞    MuM2C cells, human choroidal melanoma cells
MuM－2B细胞，人眼脉络黑色素瘤细胞    MuM2B cells, human choroidal melanoma cells
OCM-1A细胞，人低侵袭性脉络膜黑色素素瘤细胞    OCM-1A cells, human low invasive melanoma cells in choroidal melanoma
Y79细胞，人视网膜母细胞瘤    Y79 cells, a human retinoblastoma
U2OS-Luc teT-on细胞，荧光素酶转染人成骨肉瘤细胞    U2OS-Luc teT-on cells, luciferase transfection of human osteosarcoma cells
TE671 subline No.2细胞，人横纹肌肉瘤细胞    TE671 subline No.2 cells, human rhabdomyosarcoma cells
C918细胞，人眼脉络黑色素瘤细胞    C918 cells, human choroidal melanoma cells
A673细胞，人横纹癌细胞    A673 cells, human skeletal cancer cells
RD细胞，人恶性胚胎横纹肌瘤细胞    RD cells, a human malignant embryonal rhabdomyoma cells
A-431细胞，人表皮癌细胞    A-431 cells, human epidermal carcinoma cells
HaCaT细胞，人正常皮肤细胞    HaCaT cells, normal human skin cells
Malmc细胞，人皮肤纤维微细胞系    Malmc cells, human skin fiber micro cell line
BJ细胞，人皮肤成纤维细胞系    BJ cells, human skin fibroblast cell line
HT1080细胞，人成纤维肉瘤细胞    HT1080 cells, human fibroblastoma
HS-1细胞，人皮肤癌细胞系    HS-1 cells, human skin cancer cell line
HS-4细胞，人皮肤癌细胞系    HS-4 cells, human skin cancer cell line
SMC-1细胞，人胸膜瘤细胞    SMC-1 cells, human pleural tumor cells
143TK细胞，人胸腺激酶缺陷性细胞系    143TK cells, human thymidine kinase defective cell line
Tca-8113细胞，人舌癌细胞    Tca-8113 cells, human tongue cancer cells
Tca8113-P60细胞，人舌癌细胞系    Tca8113-P60 cells, human tongue cancer cell line
Tca8113-P160细胞，人舌癌细胞系    Tca8113-P160 cells, human tongue cancer cell line
T6细胞，人舌癌细胞    T6 cells, human tongue cancer cells
TSCCA细胞，人舌鳞癌细胞系    TSCCA cells, human tongue squamous cell carcinoma cell line
GNM细胞，上颌牙龈癌颈淋巴结转移癌    GNM cells of cervical lymph node metastasis of carcinoma of maxillary gingival carcinoma
鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)LAMP试剂盒U251细胞，人星形胶质瘤细胞    U251 cells of human glioma cells.
Calu-6细胞，人退行性癌细胞    Calu-6 
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。