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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
Universal lamp kit for Ureaplasma
- 库存:
100
- 供应商:
上海一研
- 规格:
50次
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
3-羟氨苯甲酸双加氧酶抗体
舞蹈症相关蛋白40/凝血因子8相关蛋白/第八因子相关蛋白抗体
舞蹈症相关相互作用蛋白1/雌激素相关受体样蛋白1抗体
舞蹈症蛋白相互作用蛋白13抗体
神经性舞蹈病蛋白抗体
舞蹈症相关蛋白1抗体
亨廷顿相互作用蛋白1抗体
葡萄糖氧化酶1抗体
转录调节因子HOXD9抗体
羟基酰谷胱甘肽水解酶样蛋白抗体
热休克蛋白受体家族蛋白7B2抗体
Heme结合蛋白2抗体
肝细胞粘附分子2抗体
氨基己糖苷酶D抗体
HHLA2蛋白抗体
羟脯氨酸抗体
热休克蛋白10抗体
同源盒蛋白PRH抗体
羟类固醇脱氢酶17β抗体
疱疹病毒相关泛素特异性蛋白酶7抗体
同源异型盒基因HOXA5蛋白抗体
异染色质蛋白1-α抗体
组蛋白H4抗体
乙酰化组蛋白H4抗体
三甲基化组蛋白H3抗体
二甲基化组蛋白H3抗体
二甲基化组蛋白H3K4抗体
二甲基化组蛋白H3K9抗体
三甲基化组蛋白H3抗体
乙酰化组蛋白H3抗体
乙酰化组蛋白H3抗体
磷酸化肝细胞核因子4α抗体
高迁移率核小体结合蛋白1
磷酸化组蛋白H3抗体
组织相容性复合体α抗体
肝细胞生长因子激活抑制蛋白2抗体
脲原体通用LAMP试剂盒HOMER2抗体
乳头瘤病毒调控因子1抗体
人类乳头状瘤病毒18 E6单克隆抗体
异质核糖核蛋白F抗体
异质核糖核蛋白K抗体
异质核糖核蛋白L抗体
HER2受体单克隆抗体
乳腺癌细胞分化因子P45抗体 Heregulinβ
肝脂酶抗体
磷酸化组蛋白去乙酰化酶1抗体
解旋酶样转录因子抗体
三羟基三甲基辅酶A合成酶2抗体
人类白细胞抗原抗体A抗体
羟类固醇脱氢酶17β2抗体
羟类固醇脱氢酶17β-HSD抗体
人肝细胞单克隆抗体/肝细胞特异性抗原抗体抗体
小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体
铁调节蛋白/铁调素抗体
热休克蛋白J1抗体
发状分裂相关增强子-5抗体
磷酸化热休克蛋白90α抗体
磷酸化组蛋白H2AX抗体
磷酸化组蛋白H3抗体
磷酸化组蛋白H3抗体
磷酸化组蛋白H3抗体
组蛋白去乙酰化酶5抗体
A型流感病毒H5N1凝集素
人巨细胞病毒UL49蛋白抗体
肝细胞核因子1β/HNF-1β抗体
HHLA3蛋白抗体
HHIP样蛋白2抗体
A型流感病毒H3N2-M2蛋白抗体
HSH2D抗体
水蛭素抗体
白细胞抗原抗体A抗体
人乳头瘤病毒16型E7抗体
人类乳头状瘤病毒58 E6蛋白抗体
人类乳头状瘤病毒16抗体
人类乳头状瘤病毒18 E7抗体使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500nm,最大发射光谱在 530nm。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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文献和实验释放酶活;一类是抗体法修饰的热启动酶,如 Champagne Taq ,预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间,方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢?如果实验对保真度的需求不高,那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍,可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段,对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
种属不能通用。常见待测样本类型有:血清、血浆、细胞上清、组织匀浆、细胞裂解液等。实验前,需要判断试剂盒能否满足目标物种的目标蛋白检测。 03 明确试剂盒的检测范围 试剂盒的检测范围即标准曲线范围。标准曲线范围不等同于样本浓度范围,所以,要特别注意判断待测样本浓度是否落在标准曲线范围内。对于浓度很高的样本,建议先通过预实验,摸索出合适的稀释倍数后,再大量测定样本。 04 明确试剂盒的国际质控标准 1 稀释线性 一般指样本稀释线性,即:将样本梯度稀释,看各稀释梯度浓度是否成线性;对于高浓度样本
的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积。 洗涤技术 如果使用自动洗板机或多通道移液器,请确保进出口能正常运作。 最后一次洗涤后,翻转酶标板倒出多余的洗涤液,并在吸水纸上拍干液体。洗板太快或太慢都会降低精确度。不能让孔内液体自然风干,需立即进行下一步操作。 按照说明书,添加足量的洗涤液至孔内,并保证洗涤完全。 由于洗涤液不是通用的,当试剂盒内的洗涤液用完时,请不要使用其他试剂盒中的洗涤液。如有需要,可联系技术支持寻求帮助。 不要减少或增加洗涤时的浸泡时间或跳过浸泡的步骤。 按照说
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