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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
Lake iseck virus RT-LAMP Kit
- 库存:
100
- 供应商:
上海一研
- 规格:
50次
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Homo sapiens (Human)
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Mus musculus (Mouse)
内皮素1(EDN1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Endothelin 1 (EDN1) 96T Rattus norvegicus (Rat)
氨基端前脑钠素(NT-ProBNP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for N-Terminal Pro Brain Natriuretic Peptide (NT-ProBNP) 96T Homo sapiens (Human)
铁蛋白(FE)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
铁蛋白(FE)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Ferritin (FE) 96T Homo sapiens (Human)
载脂蛋白A1(APOA1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1) 96T Homo sapiens (Human)
组织因子(TF)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Homo sapiens (Human)
组织因子(TF)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Tissue Factor (TF) 96T Mus musculus (Mouse)
纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1) 96T Homo sapiens (Human)
髓鞘碱性蛋白(MBP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
伊塞克湖病毒RT-LAMP试剂盒髓鞘碱性蛋白(MBP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Myelin Basic Protein (MBP) 96T Homo sapiens (Human)
皮质酮(CORT)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Corticosterone (CORT) 96T General
脑钠素(BNP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Brain Natriuretic Peptide (BNP) 96T Homo sapiens (Human)
免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin M (IgM) 96T Homo sapiens (Human)
免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin M (IgM) 96T Mus musculus (Mouse)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Canis familiaris; Canine (Dog)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Capra hircus; Caprine (Goat)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Equus caballus; Equine (Horse)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Felis catus; Feline (Cat)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Chicken (Gallus)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Cavia (Guinea pig )
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Homo sapiens (Human)
免疫球蛋白G(IgG)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Immunoglobulin G (IgG) 96T Mus musculus (Mouse)
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(最好用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500nm,最大发射光谱在 530nm。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
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文献和实验的5'和3’末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术,主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端,包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善,克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等,1995:Schaefer,l995: Chen,1998: Bespalova等,1998: Matz等11999)。对传统RACE技术的改进主要是引物设计及RT
组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注,短短几年,该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中,在这次甲型H1N1流感事件中,日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广,LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中,并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外,操作十分简单,对仪器设备要求低,一台水浴锅或恒温箱就能实现反应,结果的检测也很简单,不需要像PCR
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