线粒体分离和线粒体酶提取测定试剂盒

线粒体分离和线粒体酶提取测定试剂盒详细如下：
测定意义
线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所， 为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。
需自备的仪器和用品
超声波破碎仪、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂三：10mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂四：1mL×1 支，-20℃保存； 
线粒体分离和线粒体酶提取测定试剂盒
提取步骤
1、 准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂四，用冰浴
匀浆器或研钵研磨。
2、 4 ℃ 600 g 离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g 离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于研究线粒体蛋白向胞浆的释放。
5、 沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。
6、 在沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W， 超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体酶活性测定。
7、 在沉淀中加入 200uL 试剂三和 2uL 试剂四，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W， 超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。
注意事项
1、 分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或 4℃进行，所用溶液需冰浴或
4℃预冷。
2、 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 600g 和 11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用 1000g 和 3500g。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 
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