线粒体呼吸链复合体Ⅱ测定试剂盒

QYS-23014	线粒体呼吸链复合体Ⅱ测定试剂盒	微量法 100管/96样
QYS-23015	线粒体呼吸链复合体Ⅱ测定试剂盒	可见分光光度法 25管/24样

测定意义： 线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q 还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的 线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD 还原为 FADH2，后者进一步还原 氧化型辅酶Q 生成还原型辅酶 Q，是呼吸电子传递链的支路。复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶 Q 可进一步还原 2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有特征吸收峰，通过检测 2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
需自备的仪器和用品： 
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰和蒸馏水。 
试剂组成和配制： 
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存； 
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存； 
试剂六：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存；
样本的前处理： 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： 
1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆 器或研钵匀浆。 
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。 
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。 
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选 做）。 
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅱ酶活性测定。
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