抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）

免疫荧光实验指南

纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，在荧光显微镜下观察采集图像。

一文理清免疫荧光实验流程和常见问题

PBST， 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min，共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中孵育1h后，回收二抗，接着用PBST洗3次，每次5 min；由于荧光容易淬灭，故从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都要避光。  6. 复染核（定位的关键） 在玻片上滴加DAPI，并注意避光孵育5min，对标本进行染核，然后用PBST洗3次，每次5min，洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察

DAPI染色

；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。