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大鼠ET-1检测实验
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上海达为科生物科技有限公司
大鼠ET-1检测实验服务的原理:
用纯化的大鼠内皮素1(ET-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入内皮素1(ET-1)再与HRP标记的ET-1抗体结合,形成抗体抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠皮素1(ET-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素1(ET-1)浓度。
大鼠ET-1检测实验服务的样本处理要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转1分)。仔细收集上青,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转1分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000 转1分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集.上清。检测细胞内的成份时,用PBS (PH7.2-7.4) 稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000 转1分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入- -定量的PBS, PH7.4. 用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8"C的温度。加入一定量的PBS (PH7.4), 用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于20C保存,但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP) 活性。
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