禽白血病病毒亚群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功

实时荧光定量 PCR 的原理及应用

定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

或者 Ct 值偏大的样本孔，到底是真的没有要检测的对象，还是扩增有问题，亦或是提取中的问题？为了发现这种假阴性的发生，合理的阳性对照可以监控实验的不同步骤： 扩增对照 Amplification Control 可使用含有扩增片段的质粒、假病毒或者基因组 DNA/cDNA 作为扩增阳性对照，监控荧光定量 PCR 的体系是否正常，包括酶、引物、探针等。如果检测中包含多个目标片段，可以将这些目标片段都克隆到同一个质粒中，方便制备和使用。当扩增对照没有扩增，或者 Ct 值大于预期，则说明定量 PCR