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阿尔茨海默病动物模型构建
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上海达为科生物科技有限公司
阿尔茨海默病动物模型
动物类型:昆明小鼠
造模试剂(1):Aβ25-35
造模方法:小鼠经腹腔注射麻醉,固定于脑立体定位仪,暴露前卤,参照脑立体定位图谱,每只小鼠右侧脑室注射3μl Aβ25-35(2μg/μl)。坐标为前卤后1.2mm,矢状缝右侧旁开1.2mm,即为侧脑室的体表部位,进针深度为颅骨表面向下3.2mm;注射时进针1μl/min,注射后留针8min,拔针时速度为1mm/min。
造模试剂(2):AlCl3
造模方法:小鼠右侧脑室内注射3μl AlCl3(2.5%),注射坐标方法同上。
造模试剂(3):海马物理损伤
造模方法:小鼠固定于脑立体定位仪,坐标为前卤后2.4mm,矢状缝右旁开2.0mm,使用自制首端弯曲的9号针头垂直插入两侧海马,顺时针转一周,进针深度为颅骨表面向下3mm。
直接购买AD转基因小鼠(4)
转基因模型可分为:APP转基因模型,PS-1转基因模型,ApoE4转基因模型,tau蛋白转基因模型,双重和三重转基因模型
造模方法:各转基因动物AD模型制作方法和原理基本相同,以APP转基因动物模型为例:
从人类cDNA文库可获取h-APP基因cDNA可表达片段,在5’端连接合适的启动子,3’端连接SV40及其PolyA尾既构成外源h-APP基因。H-APP基因经体外扩增,裂解纯化去除质粒序列后,通过一定的方法直接注入小鼠受精卵或早期胚胎细胞核内使之稳定地整合于染色体内,将该受精卵或胚胎细胞植入假孕母*宫或输卵管内发育成熟,即可获得稳定表达外源h-APP基因的基因鼠。
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