植物热休克转录因子ELISA检测试剂盒

植物热休克转录因子ELISA检测试剂盒使用说明书

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
ECC显色培养基    用于大肠杆菌和大肠菌群的鉴定和计数    1000ml            
        25L            
O157显色培养基    用于大肠杆菌O157的分离和鉴定    1000ml            
        25L            
O157显色培养基（改进型）    用于大肠杆菌O157的分离和鉴定    1000ml            
O104显色培养基    用于大肠杆菌O104的分离和鉴定    1000ml原装            
金黄色葡萄球菌显色培养基    用于金黄色葡萄球菌的鉴定和计数    1000ml            
        500ml            
        5L            
MRSA显色培养基    用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离和鉴定    1000ml            
        5L            
李斯特菌显色培养基    用于产单核李斯特菌的分离和鉴定    1000ml            
        5L            
李斯特菌鉴定显色培养基    用于将李斯特菌鉴定到种    250ml            
弧菌显色培养基    用于霍乱弧菌、副溶血弧菌的分离和鉴别    1000ml            
        5L            
沙门氏菌显色培养基    用于鉴别包括伤寒杆菌在内的沙门氏菌    1000ml            
        25L            
植物热休克转录因子ELISA检测试剂盒沙门氏+菌显色培养基    可以检测包括乳糖阳性的沙门氏菌    1000ml            
        5L            
VRE显色培养基    用于耐万古霉素肠球菌的分离及鉴定    1000ml            
假单胞菌显色培养基    用于假单胞菌的分离及鉴定    1000ml            
        5L            
B群链球菌显色培养基    用于从临床标本中分离和检测B群链球菌    1000ml            
ESBL显色培养基    用于产超广谱β内酰胺酶(ESBL)的耐药菌株的分离和鉴定，同时抑制带有ampC抗性细菌的生长    1000ml            
KPC显色培养基    用于对碳青霉烯酶类抗生素敏感度减低的革兰氏阴性菌分离和鉴定    1000ml            
CTX-M显色培养基    用于新型超广谱β内酰胺酶(ESBL)产生菌CTX-M型的分离和鉴定    1000ml            
Agar 琼脂粉    Japan    500g            
Agar 琼脂粉    Japan    1kg            
L-Arginine L-精氨酸    Japan    100g            
L-Aspartic acid L-天门冬氨酸    Japan    100g            
L-Trptophan L-色氨酸    Japan    25g            
L-Trptophan L-色氨酸    Japan    100g            
L-Arabinose L-阿拉伯糖    Sigma    10g            
Malt Extract 麦芽提取物    Sigma    500            
细菌学氯化钠 (LP0005)    Oxoid    　            
细菌学明胶 (LP0008)    Oxoid    　            
细菌琼脂（1 号琼脂）Agar Bacteriological(Agar No.1)    Oxoid    500g    
样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材:
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算:
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。