人生长因子ELISA检测试剂盒

人生长因子ELISA检测试剂盒使用说明书

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
土壤基因组DNA提取试剂盒    ?50次 
细菌基因组DNA提取试剂盒    50次
血液基因组提取试剂盒    50次 
真菌基因组DNA提取试剂盒    50次 
植物基因组提取试剂盒    ?50次 
EB染色液    10ml
Goldview核酸染料    1ml
RealRed核酸染料    500μl 
RealSafe核酸凝胶染色剂    500μl
SYBR 核酸染料    ?50μl
14.4KD单条蛋白Marker       50mg 
36KD单条蛋白Marker       10mg 
66KD单条蛋白Marker       50mg 
ECL发光Marker       20次 
彩虹预染超低分子量蛋白Marker（1.2-45KD）       10次 
彩虹预染宽分子量蛋白Marker（10-260KD）       20次 
超低分子量蛋白Marker I（3.3-22KD）       10次(100μl) 
超低分子量蛋白Marker III（3.4-100kd）       10次 
超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)       10次 
低分子量蛋白Marker II（14.4-116KD）       20次 
低分子量蛋白质Marker I (14.4-97.4kD)       20次 
高分子量蛋白Marker（43-200KD）       20次 
高分子量非变性电泳蛋白质Marker（66-669 kD）       20次 
人生长因子ELISA检测试剂盒碱性蛋白非变性电泳蛋白Marker       50次 
宽分子量蛋白Marker（10-200KD）       20次 
三色预染宽分子量蛋白质Marker（10-180kD）       50次/400元/2×50次/600元/10×50次 
双色预染宽分子量蛋白Marker（10-170KD）       20次 
DAB显色试剂盒       100ml 
FastBlue蛋白染色液       500ml 样本处理及要求:
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材:
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
注意事项:
1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6.在储存和温育时避免强光直接照射。
7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9.不能使用过期产品。
10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算:
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。