快速银染试剂盒
产品简介:
快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染的试剂盒。本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染,并且染色后兼容后续的质谱检测。本试剂盒只需约90分钟内可以完成凝胶的银染。对于BSA蛋白,检测灵敏度可以达到0.3ng蛋白。
本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。
说明书后附有实验记录表格,方便记录实验步骤。
常见问题:
1、 背景太深:
(1)显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束,显色反应时间过长会导致背
景很深。
(2)洗涤不充分。洗涤时间过短,或洗涤液加入的量不足,或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合,或摇动速度过慢,导致混匀不充分。请按照说明书的建议确保各种溶液的用量和作用时间,摇床的推荐速度为60-70rpm。
(3)凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。一方面需确保固定的时间和固定液的用量,另一方面对于不是最常用的Bis-Tris缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分去除凝胶中的原有缓冲成分,以降低背景。
(4)水的纯度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。
2、 蛋白条带非常浅:
(1)蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。半胱氨酸残基的存在对于银染非常重要,半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。
(2)银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间,水洗涤的时间不能超过1.5分钟,否则会导致过多的银离子被洗去,导致检测灵敏度下降。
(3)样量不足。本试剂盒检测BSA的灵敏度可以达到0.3ng,对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于1ng的蛋白量才能被检测到。
(4)固定步骤后的洗涤不够充分。导致少量乙酸残留,影响后续检测。确保30%乙醇洗涤和水洗涤的用量和时间,可以适当延长洗涤时间。
3、凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹:
(1)凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器,并加入足量的各种溶液,同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
(2)用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤,随后用自来水充分冲洗,最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染,并注意避免各种可能的蛋白污染。为确保充分洗涤干净,对于耐硝酸的容器,例如玻璃容器,可以在上述洗涤剂及自来水洗涤后用50%硝酸洗涤,随后用高纯度水充分洗涤。
(3)指纹或其它压痕。请注意戴手套操作,切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
(4)有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。
4、在60-70 kD处出现一片模糊的蛋白染色背景:
皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。一方面需注意戴手套操作,另一方面需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开,甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避免可能的角蛋白污染。
5、在凝胶的顶端处出现黄色背景:
(1)样品中DTT浓度很高。采用其它适当的还原试剂,或者在许可范围内适当减少DTT的用量。
(2)采用Tris-Glycine-SDS电泳体系。Tris-Glycine-SDS电泳体系中的Glycine会导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。
6、银在染色器皿中出现沉淀:
染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。需确保把染色器皿洗涤干净。
保存条件:
常温保存,开封后一年有效。