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Zeta-Probe 尼龙膜是抗拉、强度高,带高密度季铵的正电荷尼龙膜。这些柔韧的 尼龙膜能避免转移、杂交或再标记过程中的皱缩、撕裂、或脆裂。
Zeta-Probe 膜能在任何pH 缓冲液中结合核酸,可用于传统的Southern 杂交、 快速碱性Southern 和Northern 杂交技术、以及电泳转移琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶 中的核酸。Zeta-Probe 膜可进行反复杂交并用100°C, 0.5% SDS, 0.1 x SSC 洗脱, DNA 杂交多达20 次(Li et al. 1987),RNA 为6 次(Gatti et al. 1984)。6 碱基长度的 寡核苷酸也可与膜结合,而长度> 20 个碱基的寡核苷酸在反复杂交和洗脱后仍能被保 留。
Zeta-Probe GT 膜(基因组DNA 测试)符合Zeta-Probe 膜的所有性能指标,且每批次都经过功能性测试确保 在5 µg 全基因组DNA 中检测到3 pg 的单拷贝人类VIII 因子DNA。第二段质量控制测试(QC)中,膜通过2 种途径 转印:标准的高盐(10 x SSC)Soutern 转移,和4 小时的碱性转移。QC 规程中,5µg 和10µg 酶切的人类基因组 DNA 用同位素标记的VIII 因子cDNA 探针进行杂交。这分别相当于1.5 和3.0pg 的真正目标DNA。探针的杂交可 通过感光胶片曝光过夜来观察,并另外曝光3 天以检测非特异性背景。Zeta-Probe GT 膜附带性能认证,其中包含 测试规程概要。
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文献和实验与大家分享一种高分辨率聚丙烯酰胺凝胶的制备方法——Enhanced 聚丙烯酰胺凝胶(EP凝胶) EP凝胶使用短胶板制备,一般10cm即可,制备后分辨率能达到1bp,并且核酸电泳条带比老方法制备的聚丙烯酰胺凝胶电泳条带更分散,更清晰。 9%-12%的聚丙烯酰胺凝胶能达到1bp分辨率,6%-8%的凝胶能达到4bp的分辨率。 Gel Conc. DNA Range bp Acrylamide-Bis, 40%, (29 : 1) Deionized Water TAE Buffer
. 20X SSC Stock Solution Add 175.3g NaCl and 88.2g sodium citrate to 800 ml distilled water and pH to 7.0. Add water to 1000 ml and autoclave to sterilize. Removing Probe From Nylon Membranes 1. If reprobing is desired, do not allow the Zeta-Probe
: Do not reverse polarity. This will result in damage to the stainless steel cathode. 9. Turn on the power supply. Transfer mini gels for 15-30 min. at 10-15 V. Large gels can be transferred for 30 min. to 1 hr. at 15-25 V. Do not exceed 25 V
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