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文献和实验phosphorylation)和单体法(Building block approach),如Figure 2所示。前者是在多肽序列合成结束后再在固相载体上对丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链羟基进行磷酸化,可以在同一次合成中同时得到带有和不带有磷酸化位点的多肽;而后者则将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,操作较前者更为简单,现已成为磷酸化多肽合成的首选策略。 在采用单体法构建磷酸化多肽时,目前广泛采用的原料为侧链单苄基保护的氨基酸:Fmoc-AA(PO(OBzl)OH)-OH (AA = Ser, Thr
. This design is recommended as other vessels (even some which are commercially available) are not able to withstand repeated heating to 155o C in the presence of HCl vapor. Access to a vacuum source and fume hood are also required. At all times, contamination
检验,树脂颗粒应该显蓝色。将1mmolFmoc氨基酸、2.1ml0.45molHB-TU/HOBT(1mmol)、348glDIEA(2mmol)加入树脂中,振荡不少于30min。 5)排尽液体后用4XDMF洗涤树脂。 6)进行二氢茚三酮测试,若为无色,从步骤2)开始重新合成;若为蓝色,回到步骤5)与Fmoc氨基酸重新结合,如有需要,可增加这一步的反应时间。 6、用Fmoc-磷酰酪氨酸合成含磷酰酪氨酸的肽段 所需试剂:Na-Fmoc-O-磷酰酪氨酸1g。 1)若用ABI多肽合成仪进行
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