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文献和实验;3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品,1700×g,离心 10 min。如果样品溶解得不好,再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液,重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质,重复抽提一次,将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中;4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇,12 000 rpm 离心 2 min;5. 用 70% 乙醇洗涤,晾干,沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)
放大,因此灵敏度不如间接标记的方法。实验用具及材料相关溶液的配制1)20×SSC:175.3g NaCl,88.2g柠檬酸钠,加水至1000mL(用10mol/L NaOH调pH 至7.0)。2)去离子甲酰胺(DF):将10g混合床离子交换树脂加入100mL甲酰胺中。电磁搅拌30min,用Whatman l号滤纸滤。3)体积分数70%甲酰胺/2×SSC:35mL甲酰胺,5mL 20×SSC,10mL水。4)体积分数50%甲酰胺/2×SSC:100mL甲酰胺,20mL 20×SSC,80mL水。5)体积
2+ 的D-Hanks液,使用时添加100 IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素、100μg/ml庆大霉素和0.25μg/ml两性霉素B,过滤除菌后备用;②表皮消化液。为0.25%的胰蛋白酶溶液。用2.5%的胰蛋白酶溶液0.5ml加4.5ml的无Ca 2+ 、Mg 2+ 的D-Hanks液;③细胞分散液。主要用于细胞分离消化过程中防止细胞聚集形成团块。用MCDB153培养基配制含1.25U/ml中性蛋白酶、0.1%(V/V)透明质酸酶和10%胎牛血清即成细胞分散液,另添加2mmol/L CaCl
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