novagen特约代理商|70666-4 Ni-NTA Hi

NI-NTA蛋白提纯的原理、步骤与常遇问题分析

.ns②A1; PET21空载体; 200ml诱导表达菌液; 2. 步骤： 2.1 50ml灭菌离心管收集菌液，用冰冷10ml PBS 清洗菌液1次，离心 2.2 重悬8ml bind buffer ，冰上超声破碎，10s间隔，至菌液不在粘稠，分装至EP管， 2.3 4℃ 14000r/min 20min，分离上清，沉淀用5ml Buffer A+DTT重悬 2.5混匀50%NI-NTA，吸2ml 50%NI-NTA ，上柱(做2个柱

样品体积增加后，对蛋白质的纯化效率有怎样的影响？

的填料体积进行纯化，并且又在重力条件下进行，无法对流速加以调整。对于 Ni Sepharose Excel 填料而言，回收率低的原因是否又与以上有关？ 接下来的实验使用 1 ml 的 Ni Sepharose Excel 填料的纯化，从而使得样品在填料中的停留时间的以增加到约 1 min 左右。实验发现，停留时间增加后，回收到蛋白的量也得以有了提高。POOR EXCEL RESIN’s RECOVERY – RESIDENCE TIME MATTERS Strep-Tactin®XT 和 Twin

E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit Spin Protocol Eukaryotic Cells and Tissues

-through. Then with the collection tube empty, centrifuge the spin cartridge at 10,000 x g for 2 min at room temperature to completely dry the HiBind® matrix. 11. Transfer the column to a clean 1.5 ml micro centrifuge tube (not supplied with kit) and elute the RNA with 30-50