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- 2025年07月15日
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文献和实验Clonality - X Chromosome Inactivation Assay
(Life Technologies) 10X PCR buffer (100 mM Tris-HCL pH 8.3, 500 mM KCL, 15 mM MgCl2, 0,01 % w/v gelatin, autoclaved) (Perkin Elmer) dNTP, each 10 mM (Perkin Elmer) 7-deaza dGTP, 10 mM (Boehringer Mannheim) DMSO, minimum 99.5%, GC (Sigma
Western blotting using ECL reagent
membrane (Amersham Life Science; cat # RPN2020D)Kodak X-OMAT (XAR-5, 18X24 cm; cat # 8532665)10X TBS12.11 g Tris-base (100 mM)87.66 g NaCl (1500 mM)1 liter dd H2OAdjust pH= 7.6Washing buffer (TBS-T): 100 ml 10X TBS + 900 ml dd H2O + 1 ml Tween-20.Blocking
Enzyme Kinetics assay of the WT
A typical assay to establish the apparent pH of the normal & mutant HSD17B3 enzyme used: * Serial variation of pH (range4.5pH -8.5pH), for the reaction Buffer : 100mM Tris -citrate/2mM DTT . * Steroid substrate was added at final
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