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- Aviva Systems Biology
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- 2025年07月15日
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文献和实验Clonality - X Chromosome Inactivation Assay
(Life Technologies) 10X PCR buffer (100 mM Tris-HCL pH 8.3, 500 mM KCL, 15 mM MgCl2, 0,01 % w/v gelatin, autoclaved) (Perkin Elmer) dNTP, each 10 mM (Perkin Elmer) 7-deaza dGTP, 10 mM (Boehringer Mannheim) DMSO, minimum 99.5%, GC (Sigma
TOP10 chemically competent cells
10 mM KOAc pH 7.0 (10 ml of a 1M stock/L) 80 mM CaCl2 .2H2 O (11.8 g/L) 20 mM MnCl2 .4H2 O (4.0 g/L) 10 mM MgCl2 .6H2 O (2.0 g/L) 10% glycerol (100 ml/L) adjust pH DOWN to 6.4 with 0.1N HCl if necessary
珠子对照样品外每个样品中加入一抗，抗体的量按照以往经验来加，1-10ug的抗体/25ugDNA效果较好。3加入20ul的proteinA/G珠子（预先用超声处理成为单链的鲱精DNA和BSA吸附，详见步骤4.3a）到所有样品总，4°C摇转IP过夜。3a将蛋白A/G珠子与单链鲱精DNA进行预处理。如果同时使用蛋白A珠子和蛋白G珠子，等体积混合这两种珠子使用RIPA溶液洗3次。除去RIPA溶液，加入单链鲱精DNA到珠子终浓度为75ng/μl，再用BSA将珠子终浓度定到0.1μg/μl。加入两倍珠子
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