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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)可与IC中IgG的Fc段结合。将待测血清用低浓度PEG沉淀后加至SPA包被的固相载体上,再以酶标记的SPA与之反应,即可检测样本中有无IC。1、试剂(1)5%与2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制;(2)牛血清白蛋白(BSA)缓冲液:用0.05mol/L pH 7.4PBS配制。含0.01mol/L EDTA、0.1%硫柳汞、0.05%Tween 20及4%BSA;(3)HRP-SPA用改良过碘酸
聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的直链大分子多糖,可非特异性地引起蛋白质沉淀。沉淀具有可逆性,被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响。不同浓度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白质,在pH值、离子浓度等条件固定时,蛋白质分子量越大,用以沉淀的PEG浓度越小。由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性,所以在IC测定中主要采用PEG6000。PEG使IC沉淀的机理可能在于使其自液相中空间排斥而析出,此外,PEG还可抑制CIC解离,促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物
细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术,这类方法有灵敏度较高,特异性较强等优点,但需进行活细胞培养或细胞分离,影响因素多,重复性较差,目前仅适用于实验研究。此类技术有多种方法。 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤患者分离建株的B淋巴细胞系。可在体外连续传代培养,细胞表面没有膜免疫球蛋白,Pc受体的亲和力很低,但有C3、C3b和C3d受体及Clq受体,而且不易脱落。因此能使结合补体的IC吸附在细胞上,然后再于反应系统中加入荧光素或i125
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