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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验Gene Editing in One‐Cell Embryos by Zinc‐Finger and TAL Nucleases
male mice for mating M2 medium (embryo tested, Sigma, cat. no. M7167) Hyaluronidase (type IV‐S from bovine testes, embryo
情况。2. 实验步骤① 培养板接种细胞之前先用 marker 笔在 6 孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一个视野);② 细胞消化后接入 6 孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底);③ 细胞铺满板底后,用 10μL 枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致;④ 培养板接种细胞之前先用 marker 笔在 6 孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一个视野);⑤ 加入含有 4 μg/mL 丝裂霉素(防止细胞增殖过快)的完全/基础培养基,拍照记录;⑥ 将培养板放入培养箱培养
方法。 收获细胞(保证健康的单细胞悬液)。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager(MDCI10000)观察到细胞融合度应为80-90%,且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中,例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注:可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管,以实现单细胞悬浮。
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