bioptic特约代理商|C105110 Qsep100-R

体内表达shRNA（短发夹RNA）的设计

1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。 3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。 4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子有一定空间间隔以确保转录的发生。 5.ShRNA目的

凝胶电泳新纪元

灵敏 —— 检测下限可达0.1 ng/μl的核酸 ♦ 高通量 —— 每批可多达96个样品 ♦ 高分辨率 —— 可分辨3-5 bp的差异 ♦ 方便 —— 使用预制胶卡夹 ♦ 安全 —— 减少与有害化学物的接触预制胶卡夹 ♦ 预制胶卡夹包括12个分离通道和一个内置凝胶槽 ♦ 即用型胶卡夹，无需制备凝胶，使用方便快速 ♦ 安全、环保 ♦ 四种卡夹满足DNA/RNA分析的各类应用 ♦ 一个试剂盒，包括了电泳所需的卡夹、缓冲液等 软件 ♦ 电泳结果实时显示 ♦ 自带多种电泳

垂直电泳槽的使用

，以确保胶条插入位置准确。合拢灌胶模具后并直立放置，双手均匀用力向下扣住翼型扳手以关闭灌胶模具。若位置正确，校准卡应该可以正常上下抽拉活动而不被夹在胶条与玻璃板之间。（图3- 5） •用5 ml分离胶溶液（图 6）制备浓度为12％的SDS-PAGE凝胶，然后用移液管将1 ml乙醇滴入装好的灌胶模具中。等候60分钟使凝胶聚合。当把溶液倒入玻璃板夹层之间时，将移液管嘴直接置于玻璃板之间，缓慢地滴出液体，尽量避免形成气泡。凝胶完成聚合后，移除乙醇，将制备好的浓缩胶溶液倒入到分离胶上。轻轻将0.75 mm