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上海玉博生物科技有限公司
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文献和实验, 20 分。 ( v )用 20ml 冰冷溶液 I 将第二次离心沉淀调成均匀悬浮液。 ( vi )每 ml 悬浮液加入 2mg 溶菌酶,并在 0 ℃ 冰浴中放置 10 分钟。 ( vii )加入 40ml 溶液 II ,轻轻搅拌后,在冰浴中放置 5 分钟。 ( viii )加入 30ml 溶液 III ,在冰浴中放置 20 分钟,使蛋白质大部分沉降。 ( ix )在高速冷冻离心机上用角式转头, 10,000rpm (约 10,000xg )离心 15 分钟, 5 ℃ 。 ( x )小心地倒去上清
1、标记:本试剂盒采用随机引物标记方法,可标记少至10ng,多至3μg的。能在新合成的链每20~25个核苷酸,掺入一个Dig-dUTP,反应时间约为1h。 2、杂交:按标准杂交方法进行。可以采用尼龙膜或硝酸纤维素膜。用过的杂交液可冻存于-20℃,重复使用。 3、免疫学检测:封阻后,检测反应的第一步,抗体结合物与标记结合,出现杂交的半抗原-标记,显色反应起始是在碱性pH条件下加入无色的显色剂X-磷酸盐和NBT,在几分钟内便开始出现蓝色,显色反应的过程持续3d。典型的例子是在24
: 12 小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。4.泡酸、清洗:用清洁液(重铬酸钾120g :浓硫酸 200ml :蒸馏水 1000ml )浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15 次,最后蒸馏水冲洗 3-5 次和用双蒸水过 3 次。5.烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。6.高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向 15 磅 时,维持 20-30 分钟。7.高压消毒后烘干二、旧
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